复发性外阴阴道白假丝酵母菌病的耐药机制研究

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目的:①对复发性外阴阴道假丝酵母菌病(Recurrent Vulvovaginal candidiasis,RWC)患者的致病白假丝酵母菌进行7种抗真菌药物的体外药物敏感实验,明确RWC致病白假丝酵母菌药物敏感性的差异;②对RVVC致病白假丝酵母菌进行药物外排泵相关蛋白-多药耐药基因MDR1、三磷酸腺苷结合转运蛋白家族CDR1、CDR2和PDR1基因表达产物的研究,明确上述耐药基因在RVVC耐药机制中的作用。方法:①所有243株致病菌株均取自我院外阴阴道假丝酵母菌病患者,其中RVVC (实验组)致病菌株84株,VVC(对照组)致病菌株159株,均以科玛嘉显色培养基、安图显色培养基及生物梅里埃VITEK2系统鉴定明确菌种;②以FUNGUS-7真菌药敏试剂盒对已确定的213株白假丝酵母菌致病菌株进行2种多烯类药物、4种唑类药物和5-氟胞嘧啶共七种抗真菌药的体外药物敏感试验;③以荧光定量PCR (realtime fluores-cence quantitative PCR, RTFQ PCR)对已确定的敏感、中敏和耐药白假丝酵母菌菌株进行MDR1、CDR1、CDR2和PDR1基因表达产物的研究。结果:①RVVC组白假丝酵母菌占90.48%,非白假丝酵母菌占9.52%,VVC组白假丝酵母菌占88.68%,非白假丝酵母菌占11.32%,两组白假丝酵母菌构成比没有显著差异(P>0.05);②RWC组和VVC组致病白假丝酵母菌的体外药敏结果显示:RVVC组致病白假丝酵母菌对7种抗真菌药物的敏感性依次为:制霉菌素>两性霉素B(5-氟胞嘧啶>益康唑>咪康唑>氟康唑>伊曲康唑;VVC组致病白假丝酵母菌对7种抗真菌药物的敏感性依次为:两性霉素B>制霉菌素>5-氟胞嘧啶>咪康唑>益康唑>氟康唑>伊曲康唑;IRVVC组对制霉菌素和咪康唑的敏感性显著高于VVC组(P<0.05);③分别比较RVVC组和VVC组敏感、中敏、耐药菌株中耐药基因CDR1、CDR2、MDR1、PDR1的表达差异,结果显示:PDR1基因不是在所有菌株均有表达,RWC组PDR1基因表达率明显低于VVC组(P<0.05);PDR1基因的表达量比较显示:5-氟胞嘧啶的WC-R组的表达量高于VVC-S组和VVC-I组(P<0.05),两性霉素B的VVC-R组高于VVC-I组(P<0.05),伊曲康唑的RWC-R组高于WC-S组、WC-R组和RVVC-S组(P<0.05);CDR1、CDR2、MDR1在所有白假丝酵母菌中均有表达,仅有CDR1基因表达量存在差异:5-氟胞嘧啶RVVC-R组明显高于WC-R组(P<0.05),咪康唑中敏、耐药合并组VVC-I+R组高于VVC-S组(P<0.05),氟康唑VVC-I组表达高于VVC-S组和VVC-R组(P<0.05),但VVC-S组和WC-R组未检出差异(P>0.05)。结论:①复发性外阴阴道假丝酵母菌病的主要致病菌仍为白假丝酵母菌;②显色培养基适于临床上白假丝酵母菌的快速鉴定,但对非白假丝酵母鉴定准确度有限;③RVVC和VVC致病白假丝酵母菌对抗真菌药的敏感性大体一致,RVVC治疗首选制霉菌素;④PDR1、CDR1基因可能为RWC和VVC患者致病白假丝酵母菌的耐药相关基因;⑤除了耐药基因表达增加以外,RWC耐药机制的发生可能存在其它更重要相关因素。
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