实验目的了解兰州地区急性呼吸道感染(ARTIs)患儿中呼吸道病原谱的分布现状,为本地区儿童急性呼吸道感染的防治提供基础数据。明确新发现病毒人博卡2病毒在呼吸道中的致病性。对象及方法1收集兰州大学第一医院儿科2008年11月到2009年10月因急性呼吸道感染就诊患儿的鼻咽抽吸物(Nasopharyngea aspirates, NPAs)和门诊患儿的咽拭子(throat swabs)及正常体检儿童的呼吸道分泌物标本。2分别采用聚合酶链反应(PCR)检测呼吸道合胞病毒(RSV)、流感病毒(IFVA、B型)、和副流感病毒(PIV 1-3型)、鼻病毒(HRV)、人偏肺病毒(HMPV)、冠状病毒-NL63(HCOV-NL63)、冠状病毒-HKU1(HCOV-HKU1)、冠状病毒-229E(HCOV-229E)、冠状病毒-OC43(HCOV-OC43)、多瘤病毒WU (WUPyV)和多瘤病毒KI (KIPyV) 14种常见及新发现呼吸道感染相关的病毒。结合详细的临床资料,做出临床流行病学分析。3建立博卡病毒的病例对照研究：采用巢式PCR (Nest-pcr)方法检测急性呼吸道感染患儿和正常儿童呼吸道标本中的HBoV-1和HBoV-2基因,并对扩增产物测序及进行Blast基因序列比对。讨论其在呼吸道中的致病性。结果1.在收集的510份呼吸道标本中,共检出病毒感染阳性病例382例(检出率74.9%)。其中RSV阳性扩增产物160份,检出率为31.4%；IFVA阳性扩增产物53份,检出率为10.4%; IFVB阳性扩增产物25份,检出率为4.9%；PIV3阳性扩增产物83份,检出率为16.1%；HRV阳性扩增产物48份,检出率为9.4%；HMPV阳性扩增产物16份,检出率为0.4%；HCoV-NL63阳性扩增产物3份,检出率为0.6%；HCoV-HKU1阳性扩增产物2份,检出率为0.4%; WUPyV阳性扩增产物7份,检出率为1.4%,KIPyV阳性扩增产物15份,检出率为2.9%,未检出PIV-1/-2和HCoV-229E/OC43。314例男性患者中病毒感染216例(58.3%),女性196例感染166例(55.5%),男女感染率的之比为1.3：1；患儿年龄最小10天,最大14岁,中位年龄28个月。其中1岁以下患儿病毒感染208例,占总病毒感染人数的54.5%；1～3岁患儿病毒感染84例,占22%；3～5岁患儿病毒感染54例,占14.1%；大于5岁患儿病毒感染36例,占9.4%。随着年龄的增长,病毒阳性检出率逐渐下降。本地区儿童病毒性急性呼吸道感染的季节分布较明显,以冬春季节为主。510份病例组呼吸道患儿标本检测到7例HBoV-2阳性扩增产物,检出率为1.4%。将阳性PCR产物进行序列测定及分析,发现其与GeneBank中已知标准株(Human bocavirus 2 strain HBoV2B-NI-213)序列的同源性在98%-100%之间,提示HBoV-2兰州株的核苷酸变异较小。患儿感染年龄从4个月到65个月,中位年龄8.5个月,除一例标本外,其余均在2岁以下儿童。全部为男性患儿。检出病例主要在冬春季节,12月检出最多。该病毒混合感染率高达57.1%,与RSV混合感染最多。临床诊断包括喘息性支气管肺炎、急性支气管肺炎、急性支气管炎,其中喘息性支气管肺炎最多见,为5例。HBOV-2在对照儿童中检出率为1.4%(4/290),HBOV-2阳性的患儿均≤6个月,标本分别在3月,5月,6月,8月中检出,男女比例为3：1。病例组中HBOV-1在病例组中检出率为14.3%(73/510),正常儿童中HBOV-1的检出率为3.1%(9/290)。结论1本研究中74.9%的患儿病毒检测阳性,结合本课题组2006-2008年的研究结果说明,病毒病原在兰州地区儿童呼吸道感染中仍占有重要地位。在2008-2009年的研究中发现儿童病毒性呼吸道感染病原以RSV、PIV-3、HRV及IFVA占主要地位,与2007-2008年相比IFVA及PIV-3两种呼吸道病毒在本地区的感染有所上升,跟2007-2008的呼吸道病毒感染谱略有差异,呼吸道病毒病原分布具有明显的季节分布特征,以冬春季节多见。2 HBOV-2与疾病：P>0.005 (Fisher’s Exact Test)无统计学意义。HBVO-2感染与呼吸道疾病无关。HBOV-1与疾病：p<0.005 (Pearson Chi-Square)有统计学意义,病例组中感染HBOV-1更高。HBOV-1可以引起呼吸道疾病。