核因子Y介导成骨相关细胞中FGFR2启动子的基础活性

来源 :暨南大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:corbet2003
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目的:成纤维生长因子(FGFR2)在骨的发育过程中具有十分重要的调控作用。但目前对于FGFR-2表达的调控机制的研究仍然不是很清楚。因此,本论文主要进行对成骨相关细胞中FGFR-2基因表达的转录调控机制及染色质开放状态进行研究,为进一步探索FGF通路及其对骨发生的调控机制打下基础。方法:首先采用DNaseⅠ超敏感和CHART-PCR实验确定FGFR2基因转录活跃区域;然后在此基础上通过双荧光报告系统搜寻FGFR2的上游启动子元件并进行精确定位;接着,再通过EMSA,ChIP,SiRNA干扰等实验确定关键转录因子;最后再次通过RNAi实验进行关键转录因子对FGFR2基因转录调控机制的研究。结果:DNaseⅠ超敏感和CHART-PCR将潜在启动子范围缩短为-143/+45之间;双荧光报告系统分析筛出FGFR-2启动子最主要的活性范围是-86/-48,并经软件预测该区域含有CCAAT box;EMSA实验证实在CCAAT box可与NF-Y转录因子特异结合;染色质免疫共沉淀实验验证了NF-Y与CCAAT box在生理状态下的原位结合;最后,SiRNA干扰内源NF-Y后,内源FGFR2表达被抑制,染色质可及性以及组蛋白H3的乙酰化都有所改变。结论:通过以上实验结果显示,NF-Y转录因子通过与FGFR2启动子上CCAAT序列结合来调控FGFR2基因的转录,同时又证明NF-Y还与染色质组蛋白H3的乙酰化有关。
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