论文部分内容阅读
目的:本课题旨在通过逆转录病毒载体将iNOS基因转染免疫活性细胞CD3AK(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cell,CD3AK),构建免疫细胞性一氧化氮供体CD3AK/iNOS(anti-CD3 monoclonal antibody activated killer cell,CD3AK;inducible nitric oxide synthase,iNOS)并探讨其对白血病细胞K562及其耐药株K562/ADM的杀伤作用。方法:培养并扩增PA317/pLNC-iNOS细胞并用G418筛选;NIH3T3细胞测定病毒滴度;扫描电镜观察PA317/pLNC-iNOS细胞表面的病毒颗粒。抗CD3单克隆抗体激活分离的外周血单个核细胞;病毒感染靶细胞CD3AK细胞及G418筛选。硝酸还原酶法检测CD3AK/iNOS细胞培养上清NO含量以及iNOS活性。噻唑蓝(MTT)法检测CD3AK/iNOS、CD3AK/NEO、 CD3AK三组不同的细胞对K562和 K562/ADM细胞杀伤活性。结果:(1)PA317/pLNC-iNOS细胞能稳定合成并分泌重组逆转录病毒颗粒。(2)通过NIH3T3细胞测定PA317/pLNC-iNOS分泌的病毒滴度为1.0x105CFU (colony forming unit)/m1。(3)扫描电镜观察PA317/pLNC-iNOS细胞表面有病毒颗粒。 (4) CD3AK/iNOS细胞培养上清中NO含量,iNOS活性较CD3AK细胞明显升高。经统计学检验,上述两项指标均有显著性差异(P<0.001)。(5) MTT法观察到对K562和K562/ADM杀伤活性,CD3AK/iNOS细胞组较CD3AK/NEO和CD3AK细胞具有更强的杀伤活性。经统计学检验,上述两者均有显著性差异( P<0.05);CD3AK/NEO与CD3AK之间无显著性差异(P>.05)且CD3AK/iNOS细胞对K562及K562/ADM具有同样的杀伤活性,两者无显著性差异(P>0.05)。结论:逆转录病毒可介导iNOS基因转入CD3AK细胞,成功地构建了CD3AK/iNOS细胞。感染iNOS基因的CD3AK细胞比未感染细胞,对K562及K562/ADM具有更强的体外杀伤作用,CD3AK/iNOS可能成为一个更有效的自体造血干细胞移植(autologous hematopoietic stem cell transplantation,AHSCT)体外净化方法。