【摘 要】
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus, RBSDV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae),斐济病毒属(Fijivirus)的成员,其基因组由10条双链RNA组成,依次命名为S1-S10.目前,R
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水稻黑条矮缩病毒(Rice black streaked dwarf virus, RBSDV)是呼肠孤病毒科(Reoviridae),斐济病毒属(Fijivirus)的成员,其基因组由10条双链RNA组成,依次命名为S1-S10.目前,RBSDV全基因组都已完成测序,但是对它们编码蛋白的功能还了解不多.以感病玉米叶片为材料,通过RT-PCR方法克隆得到了RBSDV S7的cDNA片段,序列分析表明,S7全长2193bp,其中包含两个大的非重叠的ORF,分别编码分子量为41.0kDa(P7-1)和36.3kDa(P7-2)的非结构蛋白.两个ORF均在大肠杆菌中进行了表达,并制备了相应的抗血清.利用酵母双杂交系统,检测到RBSDV P7-2蛋白能在酵母体内激活基因的转录.缺失突变体的研究结果表明该蛋白的N端50个氨基酸残基与这种转录激活活性相关.为了检测RBSDV P7-2及其突变体在植物细胞内的转录激活活性,建立了一个依赖于GAL4的DNA结合区的检测系统.人工合成的由5个GAL4的DNA结合区识别序列UAS<,G-17mer>序列与CaMV 35S启动子的-46~+4部分组成了重组启动子,并将GUS作为报告基因插入到该启动子的下游构成重组报告基因,用于检测RBSDV P7-2或其突变体与GAL4 DBD形成的融合基因在烟草细胞中激活基因转录的能力.结果表明,RBSDV P7-2及其N端区域在植物细胞中同样能够激活报告基因的表达.此外,瞬时表达结果表明,RBSDV P7-2与GFP组成的融合蛋白在烟草细胞核中大量聚集,说明RBSDV P72蛋白可能具有核定位信号.选用P7-2蛋白N端50个氨基酸残基缺失突变体作诱饵,应用酵母双杂交系统对水稻cDNA文库进行了筛选,结果得到了一个能与诱饵蛋白发生相互作用的肽段.Blast分析发现该肽段是一个未知蛋白的C端片段,氨基酸序列分析结果表明,该未知蛋白可能是一个核定位蛋白.
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