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猪丹毒是由猪丹毒丝菌引起的一种人畜共患传染病。预防接种是防制猪丹毒最有效的办法。猪丹毒丝菌有26种血清型（1a、1b、2-24和N型）,我国主要为1a型（80%90%）和2型。猪丹毒菌苗包括灭活苗（2型为主）和弱毒苗（1型或2型）,1型和2型菌苗对其他血清型菌株的感染具有交叉保护。胆碱结合蛋白B（CbpB）作为猪丹毒丝菌表面保护性抗原,在发病机制中起着重要作用。本研究从42株猪丹毒丝菌安徽分离株（血清型均为1a型）中,通过致病性、抗原性和稳定性试验,筛选猪丹毒丝菌疫苗用菌株;原核表达猪丹毒丝菌CbpB蛋白鉴定其免疫活性,旨为研制免疫保护性更佳的疫苗及其联合疫苗、猪丹毒丝菌亚单位疫苗提供技术储备。根据小鼠致死性试验结果,初步筛选出4株猪丹毒丝菌（AEr9、AEr21、AEr31和AEr32）为受试菌株。第一,通过平板计数法、改良寇氏法测定菌株生长曲线及半数致死量(LD50)。第二,利用甲醛灭活全菌体,免疫兔制备阳性血清,采用微量平板凝集和琼脂扩散试验检测血清的凝集效价和抗体滴度;灭活全菌体免疫小鼠,进行攻毒保护试验,测定免疫保护率。第三,受试菌株传代培养30代,取第10、20、30代菌株分别检测LD50、沉淀抗体滴度、免疫保护率。第四,综合上述试验结果,筛选出猪丹毒丝菌疫苗用菌株。第五,PCR扩增AEr21的cbpB基因,克隆至pMD18-T载体,构建表达重组质粒pGEX-6P-1-cbpB,阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达和谷胱甘肽亲和层析柱纯化目的蛋白,再经SDS-PAGE和Western blot鉴定蛋白的免疫活性。结果显示:AEr9、AEr21、AEr31和AEr32的LD50分别为10.09 CFU/mL、35.5CFU/mL、50.3 CFU/mL、845 CFU/mL,择优选出AEr21、AEr31和AEr32。成功制备灭活全菌体V-AEr21、V-AEr31和V-AEr32,获得兔抗猪丹毒丝菌阳性血清Ab-AEr21、Ab-AEr31和Ab-AEr32,其中Ab-AEr21、Ab-AEr31与Ag-AEr21、Ag-AEr31、Ag-AEr32的凝集效价均为50%75%,沉淀抗体滴度均达1:24,抗原性优于Ab-AEr32;灭活全菌体V-AEr21对AEr21、AEr31的攻毒保护率为100%80%,V-AEr31对AEr21、AEr31的攻毒保护率为100%60%,免疫保护力均优于V-AEr32。AEr21、AEr31在传代10代内LD50分别上至103.39CFU/mL和103.64CFU/mL,之后趋于稳定至第30代;灭活全菌体V-AEr21和V-AEr31沉淀抗体效价分别由第10代1:24和1:23均下降至第30代1:22;第10代-第30代V-AEr21和V-AEr31对AEr21的攻毒保护率分别为100%80%和60%,而对AEr31的攻毒保护率分别为80%40%和100%80%。构建的重组质粒pGEX-6P-1-cbpB在大肠杆菌BL21中实现表达,获得大小为73 kD的目的蛋白,与预期大小的CbpB蛋白分子质量一致,能与猪丹毒丝菌阳性血清发生特异性反应。结果表明:根据致病性、抗原性和稳定性试验结果,综合筛选出AEr21和AEr31作为猪丹毒丝菌疫苗用候选菌株。成功克隆表达了猪丹毒丝菌CbpB蛋白,该蛋白具有免疫活性。