山杏仁蛋白酶水解物显著抑制人乳腺癌细胞增殖

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本项目以山杏仁蛋白为研究对象,用胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶等五种蛋白酶水解山杏仁蛋白,研究山杏仁蛋白酶水解物对人乳腺癌细胞(MCF-7)生长的影响。用超滤技术分离不同分子量的山杏仁蛋白酶水解物,比较具有不同分子量的肽段对MCF-7细胞生长的抑制作用,进而对不同分子量山杏仁蛋白酶水解物的氨基酸组成和含量进行分析。同时,制备山杏仁蛋白酶水解物与油酸的复合物,研究其对MCF-7细胞生长的作用。主要研究结果如下:(1)以山杏仁为原料,通过碱溶酸沉法提取山杏仁蛋白,并用胃蛋白酶、中性蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶和木瓜蛋白酶等五种蛋白酶水解山杏仁蛋白,制备山杏仁蛋白酶水解物。将五种山杏仁蛋白酶水解物,应用于细胞增殖分析实验,结果表明碱性蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶及木瓜蛋白酶水解物具有一定抑制MCF-7细胞增殖的活性,其中木瓜蛋白酶水解物抑制作用最显著。因此,以下研究集中在山杏仁蛋白的木瓜酶水解物,简称山杏仁蛋白酶水解物。(2)用超滤的方法,将山杏仁蛋白酶水解物分离为10KDa>MW>5KDa, 5KDa>MW>3KDa,3KDa>MW>1KDa及MW<1KDa四个具有不同分子量的组分。将四个组分应用于细胞增殖分析实验,检测其对MCF-7细胞增殖的影响,结果显示MW<1KDa肽段抑制细胞增殖能力最强,3KDa>MW>1KDa,5KDa>MW>3KDa和10KDa>MW>5KDa抑制能力依次减弱,表明具有较低分子量的肽,抑制MCF-7细胞增殖活性较强。(3)对具有不同分子量的组分,进行氨基酸组成和含量分析,结果表明四种组分均含有色氨酸、组氨酸、谷氨酸等18种氨基酸。亲水性氨基酸含量从高到低依次为<1KDa,1-3KDa,3-5KDa和5-10KDa组分;疏水性氨基酸含量从高到低依次为<1KDa, 1-3KDa,3-5KDa和5-10KDa组分。该结果表明具有较强抑制MCF-7细胞增殖活性的较低分子量的组分中,不仅疏水性氨基酸的含量较高,亲水性氨基酸的含量也较高。此外较低分子量组分中.,精氨酸含量较高。(4)制备山杏仁蛋白酶水解物与油酸的复合物,将其应用于细胞增殖分析实验,检测其对MCF-7细胞增殖的影响。结果表明山杏仁蛋白酶水解物结合油酸后对MCF-7细胞的增殖抑制作用得到增强。
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