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目的 内皮细胞功能紊乱是多种心血管疾病发生发展的基础,如动脉粥样硬化(AS)和高血压等。内皮一氧化氮合酶(eNOS)的抑制是内皮细胞功能紊乱的标志。导致内皮功能紊乱的机制之一即内源性eNOS竞争性抑制剂不对称二甲基精氨酸(ADMA)的积聚。最近研究发现ADMA可引起氧化型低密度脂蛋白(OxLDL)的一种重要的受体血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(LOX-1)表达的上调,亦有研究发现LOX-1的引物序列中含有NF-κB的结合位点。本实验通过ADMA干预人脐静脉内皮细胞并检测NF-κB与LOX-1的表达,同时应用NF-κB的特异抑制剂(PDTC)探讨这一过程中可能的分子机制。 材料与方法 1.细胞培养及分组 将培养的人脐静脉内皮细胞(ECV304)分成7组:(1)空白对照组;(2)ADMA 3μmol/l组;(3)ADMA 10μmol/l组;(4)ADMA 15μmol/l组;(5)ADMA15μmol/l+PDTC 50μmol/l组;(6)ADMA 15μmol/l+PDTC 100μmol/l组;(7)ADMA 15μmol/l+PDTC 150μmol/l组。 2.指标检测 (1)应用半定量RT-PCR分析内皮细胞LOX-1 mRNA表达量的变化。 (2)Western blot法测定细胞NF-κB p65蛋白表达的变化。 3.统计学处理 各组数据以均数±标准差((?)±s)表示。利用SPSS12.0统计软件,组间差异比较采用单因素方差分析,以P<0.05为差异有统计学意义。