论文部分内容阅读
研究目的:明确转录因子E2F3在前列腺癌雄激素依赖性细胞系(LNCAP)和雄激素非依赖性细胞系(C4-2,PC-3,DU145)中的表达,明确E2F3在激素抵抗型前列腺癌进展中的作用,探索激素抵抗型前列腺癌进展机制研究方法:采用Western blot检测前列腺癌雄激素依赖性细胞系(LNCAP)和前列腺癌雄激素非依赖性细胞系(C4-2,PC-3,DU145) E2F3蛋白表达;采用质粒pcDNA3.1-HA-E2F3-GFP转染LNCAP细胞,提高LNCAP细胞中E2F3蛋白表达水平,并帅选出稳定高表达E2F3蛋白的重组LNCAP-E2F3细胞系;将LNCAP-E2F3细胞系和I(?)NCAP细胞系分别采用去雄激素培养基培养,96h后进行MTT检测细胞相对活力,流式细胞检测细胞凋亡情况。研究结果:1.各组细胞系中E2F3蛋白表达有差异,LNCAP, C4-2,PC-3,DU145组E2F3蛋白相对灰度值分别为1.1095±0.0113,2.0492±0.0192,2.4395±0.0854,2.7095±0.0501:LNCAP细胞系E2F3蛋白表达较C4-2细胞系约减少了0.9397,较PC-3细胞系约减少1.33,较DU145细胞系约减少1.6,p<0.05,差异均具有统计学意义。2.质粒pcDNA3.1-HA-E2F3-GFP高效转染LNCAP细胞,并成功的构建高表达E2F3蛋白的LNCAP-E2F3细胞系,LNCAP-E2F3细胞系中E2F3的相对表达量为1.8509±0.0849,LNCAP细胞系中E2F3蛋白相对表达量为1.1014±0.027,p<0.05,差异具有统计学意义。3.LNCAP-E2F3组细胞,空质粒组细胞,无处理组细胞分别经去雄激素培养基培养96h后细胞存活率分别为0.804±0.013,0.807±0.0150,1.593±0.031。雄激素剥夺后LNCA-E2F3细胞存活率较无处理组,空质粒组细胞明显增加,P<0.01差异有统计学意义。4.LNCAP-E2F3组细胞,空质粒组细胞,无处理组细胞分别经去雄激素培养基培养72h后,细胞凋亡率分别为(24.47±1.10)%,(47.46±0.60)%,(45.56±0.61)%,无处理与空质粒组LNCAP细胞凋亡率相比P=0.22,差异无统计学意义。LNCAP-E2F3组与空质粒组相比凋亡减少23.0%,P<0.01,两者差异具有统计学意义;LNCAP-E2F3组与无处理组相比凋亡减少22.1%,P<0.01两者相比差异具有统计学意义结论:E2F3在前列腺癌雄激素非依赖细胞系中高表达,E2F3在激素抵抗型前列腺癌进展中起到重要作用,E2F3有希望成为研究前列腺癌进展阶段的重要靶标,并为控制晚期前列腺癌的进展提供治疗新途径。