茶树花皂甙的提取及其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用

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茶树(Camellia sinensis(L.)O.Kuntze)为多年生木本植物。茶树花是茶树的生殖器官之一,相对于茶树芽叶,茶树花的开发利用率很低。而研究表明茶树花具有与茶叶相似的营养成分,茶树花含有茶多糖、蛋白质、氨基酸、茶多酚、茶皂甙、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)等多种有益成分和活性物质,这些成分对人体具有解毒、抑菌、降糖、防癌抗癌、抗氧化和增强免疫力等功效,但目前对于茶树花成分的研究开发尚不充分,尤其是对茶树花皂甙的研究报道较少。近年来,随着人们生活方式和饮食习惯的改变,糖尿病的发病率急剧增加,以成为全世界发病率最高的疾病之一,糖尿病的预防和治疗逐渐受到人们的重视。因此,降糖药的开发成为了研究重点,其中,以抑制酶活性为途径的降糖药近来慢慢受到关注,此类药物的降糖效果明显且对身体危害较低。其中有抑制α-葡萄糖苷酶活性作用的药物是酶抑制剂降糖药物中较为重要的部分。因此,从茶皂甙的开发及其对α-葡萄糖苷酶抑制作用方面出发,本论文探讨优化了茶树花皂甙的提取工艺并就其对α-葡萄糖苷酶的抑制作用进行了研究。1.以茶树花为研究原料,以乙醇提取法为提取方法,以乙酸乙酯、正丁醇逐步萃取为萃取方法,以香草醛-硫酸法为茶树花皂甙的检测方法,以响应曲面法设计确定最佳提取工艺为:提取时间100min,提取温度80℃,料液比22:1。响应曲面试验方差分析可知,提取时间、提取温度和液料比对茶树花皂甙得率均有显著影响。且不同因素之间,提取时间和提取温度有很好的交互作用,提取温度和液料比也有一定的交互作用,而提取时间与液料比交互作用不明显,这一现象也证明了提取温度对茶树花皂甙得率的影响最为显著,液料比次之,提取时间影响相对最小。2.以PNPG为底物的方法测定茶树花皂戒对α-葡萄糖苷酶抑制作用大小。结果表明,实验中配制的酶溶液浓度为0.16 U/mL,酶反应的最大反应速度Vmax=0.0776 μmol/(mL·min),米氏常数Km= 8.28 mmol/L。实验获得茶树花皂戒含量和酶抑制率的回归方程可知茶树花皂甙抑制α-葡萄糖苷酶的半抑制浓度IC50为2.48 mg/mL,对比确定茶树花皂甙抑制效果优于药店出售的阿卡波糖口服药(IC50= 5.06mg/mL),有一定的研究应用价值。且实验还通过研究茶树花皂甙的抑制动力学,证明了茶树花皂戒对α-葡萄糖苷酶的抑制类型为可逆抑制,并通过双倒数曲线进一步证明了茶树花皂甙为非竞争性抑制剂,并求出抑制剂常数Ki=2.27mg/mL。而阿卡波糖抑制动力学,证明了阿卡波糖对α-葡萄糖苷酶的抑制类型为可逆抑制,且通过双倒数曲线进一步证明了阿卡波糖为竞争性抑制剂,并求出抑制剂常数Ki= 4.97 mg/mL。
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