BMP-14与bFGF联合诱导骨髓间充质干细胞向软骨分化的实验研究

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实验目的研究骨形态发生蛋白-14(BMP-14)和碱性成纤维细胞因子(bFGF)联合诱导大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)向软骨分化的协同作用。为软骨组织工程的种子细胞来源提供一种新的思路。实验方法采用密度梯度离心法与贴壁分离法相结合分离、纯化大鼠BMSCs,用含10%胎牛血清的L-DMEM培养至第三代作为种子细胞,对照组A组不加生长因子,实验组B、C、D组分别加入100ng/mlBMP-14、10 ng/ml bFGF和100ng/mlBMP-14+10ng/mlbFGF,培养24小时后各组间行细胞增殖比较,14天后终止培养,观察各组细胞形态学改变,各组间行Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色和阿尔辛蓝染色。实验结果培养24小时后,A、B、C、D四组的吸光度(A)值分别为0.4430±0.0297、0.5480±0.0370、0.6418±0.0534、0.6764±0.0417,除C、D组之间无统计学意义(P>0.05)外,余各组差异有统计学意义(P<0.05)。培养14天后,A、B、C、D四组的Ⅱ型胶原细胞染色阳性率分别为7.5210±3.7243%、40.8271±1.2787%、17.2818±1.4242%、60.5114±1.7634%;各组间差异均有统计学意义(P<0.05)。阿尔新蓝染色A组为阴性,B、C组呈淡染,D组成蓝色。结论细胞因子BMP-14和bFGF的联合应用较单个细胞因子可以明显促进骨髓间充质干细胞增殖,并能诱导其向软骨细胞表型分化。
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