巴贝斯虫是一种寄生在宿主红细胞内的血液原虫,常见种类有田鼠巴贝斯虫,东方巴贝斯虫,犬吉氏巴贝斯虫等。凡脊椎动物都有可能感染,被认为是哺乳动物血液中常见的寄生虫。目前巴贝斯虫的诊断方法有显微镜检测,体外培养,血清学试验和分子检测。其中显微镜检测仍是金标准,但需要专业人员操作,且具有主观判断性的缺点。体外培养耗时长,尚不健全,不适应于大部分实验室。分子检测目前依赖于检测梨形虫18S r RNA的通用引物,该方法得到了广泛应用,但不能区分泰勒虫和巴贝斯虫,也不能进一步判断到种属。基于此本研究建立了重组酶聚合酶结合试纸条检测方法（LF-RPA）。目前临床仍没有商业化试剂盒用于检测吉氏巴贝斯虫。考虑到临床犬患病样本多,ELISA廉价且更适用于样本数量大的流行病学研究。具体如下:1.田鼠巴贝斯虫和东方巴贝斯虫LF-RPA检测方法的建立为检测田鼠巴贝斯虫和东方巴贝斯虫,分别从线粒体COX I基因选取特异性片段,筛选出高度保守的三个区域,作为上下游引物及探针。扩增温度基本恒定在25-45℃之间即可,宽泛的扩增条件中,体温37℃成为最方便最容易满足的条件。特异性试验结果显示不与吉氏巴贝斯虫、泰勒虫等原虫发生交叉反应,具有高特异性。敏感性试验结果表明最低检测限度均为0.25个虫体/μL,比普通PCR灵敏度高40倍,具有高敏感性。选取部分临床样品进行检测,准确性高。整个反应过程15 min内完成,显著缩短了检测时间。2.吉氏巴贝斯虫iELISA检测方法的建立本研究基于BgSA1蛋白建立了检测吉氏巴贝斯虫的间接ELISA方法,对结果判定进行优化,评估了该检测方法的灵敏度及特异性。同时使用了蛋白保护剂提高了抗原包被酶标板的储存时间。之后用建立好的间接ELISA方法对武汉市三家宠物医院收集的临床血清样品进行了检测,结果显示宠物医院吉氏巴贝斯虫抗体春季临床样本阳性率为14.06%（26/192）,夏季阳性率为28.43%（85/299）,秋季抗体阳性率为20.15%（53/263）,冬季抗体阳性率为7.2%（7/111）。阳性率高的季节与蜱虫活动时间一致,呈明显季节性感染。对调查武汉宠物犬感染吉氏巴贝斯虫流行性具有一定的现实意义。总而言之,本研究成功建立了LF-RPA及iELISA检测方法,通过特异性试验和敏感性试验以及临床样品检测,结果表明这些方法特异性高、敏感性,具有良好的临床应用价值,对非实验室环境检测巴贝斯虫提供技术支持。