细胞周期(cell cycle)与多种人类疾病相关，其中最重要的是与肿瘤的关系。细胞周期的调控是一系列正负调节因子相互作用的结果，其中最关键的调控因子包括周期蛋白依赖性激酶(CDKs)及细胞周期蛋白(cyclin)等。细胞周期素(cyclin)是在调控细胞周期进程中发挥重要作用的一类特殊蛋白质。迄今为止，在哺乳动物细胞中已经发现至少有16种细胞周期素，其作用于细胞周期的各个时期，参与调控细胞的增殖分化过程。 cyclin G1是发现较晚的一种细胞周期素，在骨骼肌、卵巢及肾中表达水平较高。目前对cyclin G1的确切功能尚未完全认识。一方面，cyclinG1作为p53的靶基因，能被野生型p53转录激活，提示cyclin G1在细胞周期中可能作为负调节因子，参与DNA损伤后G2／M期的阻滞、DNA的损伤修复及细胞调亡等过程。另一方面，cyclin G1在细胞周期中又可作为正调节因子，促进细胞生长增殖。cyclin G1在不同的组织具有不同的生物活性，推测可能与其表达水平有关。 1996年，Mary C.Horne发现cyclin G1在卵巢中高表达。但cyclin G1在卵巢中表达的细胞定位，cyclin G1是否参与了颗粒细胞的增殖分化过程以及cyclin G1表达水平是否受垂体促性腺激素的调控等未见详细报道。鉴于颗粒细胞在卵泡发育过程中发生的一系列形态功能变化以及cyclin G1在其它组织细胞中的作用，本课题将研究cyclin G1在颗粒细胞中的表达是否受FSH与hCG/LH的调节，进一步阐明cyclin G1在颗粒细胞增殖分化过程的作用。性成熟小鼠经腹腔注射孕马血清促性腺激素(PMSG)，48h后取其双侧卵巢并分离颗粒细胞，于无血清培养基中进行体外培养，待细胞贴壁后分别加入外源性促性腺激素FSH和hCG作用12h后，采用半定量RT-PCR、细胞免疫组化、western blot等方法从mRNA和蛋白质水平检测小鼠卵巢颗粒细胞中cyclin Gl表达以及FSH和hCG对cyclin G1表达水平的影响，以期进一步阐明cyclin G1在颗粒细胞增殖分化调控过程中的作用。 半定量RT-PCR：收集细胞后，用Trizol提取颗粒细胞总RNA，采用一步反应法进行RNA扩增，以广泛存在于细胞中的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)作为内对照，以小鼠骨骼肌RNA作为阳性对照，分别测定cyclinG1和GAPDH条带的光密度值，并以二者的光密度比值(cyclin G1/GAPDH比值)代表cylin G1 mRNA的表达水平。颗粒细胞的免疫组织化学染色：直接于24孔板中进行细胞染色，以PBS代替一抗作为阴性对照，染色步骤按照SP法免疫组化操作方法进行。western blot：收集细胞后加入细胞裂解液，按照常规方法提取细胞总蛋白，经样品处理液处理并煮沸后用于western b1ot检测，并以β-actin作为内对照检测各样品上样量是否一致，显影后所得X光片扫描各条带的灰度值，以cyclin G1条带与β-actin条带灰度值的比值表示cyclin G1蛋白的表达水平，从而从蛋白质水平检测颗粒细胞cyclin G1的表达。 结果显示，外源性FSH和hCG作用12h后，hCG组cyclin G1 mRNA表达水平均明显降低(0．0825±O.00707，n=10)，与对照组(0.2040±O.00482，n=10)及FSH组(0.2050±0.00748，n=10)相比均有显著性差异(p<0.01)：FSH组cyclin G1 mRNA表达水平与对照组相比无明显区别(p>0.05)。western blot结果显示，hCG可明显降低cyclin Gl蛋白的表达水平(2.4270±0.09823，n=10)，与对照组 (3.7263±0.00874，n=10)和FSH组(3.6533±0.1150，n=10)相比有显著性差异(p<0.01)，而FSH组cyclin G1蛋白的表达水平变化不明显，与对照组相比无显著性差异(p>0.05);细胞免疫组化染色也得到了同样的结果。 综上所述，小鼠卵巢颗粒细胞内有cyclin G1表达，hCG可从mRNA和蛋白质水平降低cyclin G1的表达，其表达水平降低可能与hCH/LH促进颗粒细胞分化的作用有关。