目的通过观察胰高血糖素样肽-1（GLP-1）受体激动剂艾塞那肽（Exendin-4）干预治疗糖耐量减低（IGT）合并非酒精性脂肪性肝病（NAFLD）大鼠肝细胞C/EBP同源蛋白mRNA（CHOP）、CHOP蛋白、固醇调节元件结合蛋白mRNA（SREBP-1c）的变化，并光镜下观察HE染色的肝组织，以脂肪变性肝细胞数与总肝细胞数的比值评估肝脏脂肪变性程度的变化，探讨艾塞那肽对IGT合并NAFLD大鼠肝细胞抗内质网应激作用的机制。方法68只4～5周龄（l50g～180g）清洁雄性Wistar大鼠，购于山西医科大学动物中心。适应性喂养l周后（5只/笼），随机分为正常糖耐量组（NGT组，18只）与糖耐量减低组（IGT组，50只），同组动物体重相差小于10%，各组间动物体重相差小于5%。NGT组常规饲料喂养（13.4kJ/g，其中脂肪提供热量占10.2%，蛋白质占23.3%，碳水化合物占66.5%）；IGT组高糖高脂饲料喂养（21.8kJ/g，其中脂肪提供热量占56.0%，蛋白质占7.0%，碳水化合物占37.0%），均自由饮水，室温控制在18～22℃，相对湿度30%～70%，两组大鼠每日早晚各投食一次，投食量为体重的3%，12周时，行口服葡萄糖耐量试验（OGTT）：禁食8h后，鼠尾采血用快速血糖仪测空腹血糖（FBG），以50%葡萄糖注射液2g/kg灌胃，2h后再次鼠尾采血测餐后2h血糖（2hPG）。以7.8mmol/L≤2hPG＜11.1mmol/L并持续一周以上为IGT造模成功。IGT组成模40只，成模率为80%。随机取8只做肝组织HE染色，光镜下观察肝小叶内1/3以上肝细胞呈弥漫大泡性脂肪变性及气球样变者确定为IGT合并NAFLD造模成功。IGT组NAFLD成模率100%，IGT合并NAFLD成模率为80%。成模后从IGT组随机抽取16只设为干预组IGT/NAFLDEx组；另外16只设为对照组IGT/NAFLDNS组。随机抽取大鼠NGT组9只、IGT/NAFLDNS组8只、IGT/NAFLDEx组8只，禁食12小时后称重，行OGTT试验，测FBG、2hPG。次日禁食12h后用以5%水合氯醛腹腔0.6ml/100g腹腔注射麻醉大鼠，腹主静脉取血，血标本迅速离心留取血清，测定血脂谱及肝功，取血后迅速取出肝脏及脂肪组织，用冰肝素生理盐水冲洗干净并用滤纸吸干水分后，称重，计算内脏脂肪相对含量（VF/W），并留取1.5cm×1.5cm×0.5cm肝组织三块置入液氮中储存，后迅速冻存于-70℃冰箱，分别用于RT-PCR法检测CHOP mRNA、SREBP-1c mRNA的表达及Western Blotting检测CHOP蛋白的表达。另取1cm×1cm×0.5cm肝组织块浸泡于10%甲醛溶液固定，脱水，石蜡包埋，备做病理切片，待光镜观察用。IGT/NAFLDEx组予每日两次皮下注射Exendin-4（5ug/kg）干预4周；NGT组及IGT/NAFLDNS组均给予等体积生理盐水。于干预4周后全部处死，行以上指标检测。运用SPSS13.0统计软件分析，计量资料以均数±标准差（x s）表示，各组间两两比较采用单因素方差分析（ANOVA），LSD检验，P≤0.05为差异有统计学意义。肝脏CHOP mRNA、CHOP蛋白、SREBP-1c mRNA表达与肝脏脂肪变性程度的相关性采用Pearson相关分析。结果1.各组大鼠临床指标比较：干预前，与NGT组比较，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组大鼠的体重均升高（464.78 33.67 vs. 554.88 19.06）（464.78 33.67 vs. 557.25 31.92），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；肝湿重增加（13.11 1.05 vs. 16.38 1.06）（13.11 1.05vs. 16.62 1.06），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；内脏脂肪相对含量增加（1.83 0.34vs. 8.61 1.34）（1.83 0.34 vs. 8.80 1.52），差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组以上各参数差异无统计学意义（均P＞0.05），（554.88 19.06 vs 557.25 31.92.）（16.38 1.06 vs. 16.62 1.06）（8.61 1.34 vs. 8.801.52）。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组大鼠体重（614.0025.11 vs. 487.44 24.56）、肝湿重（17.25 1.04 vs. 13.38 0.92）、内脏脂肪相对含量（11.281.69 vs. 4.03 1.10）水平均降低，差异有统计学意义（均P＜0.05）。与干预前IGT/NAFLDEx比较水平均降低，（557.25 31.92 vs. 487.44 24.56）（16.62 1.06 vs. 13.38 0.92）（8.801.52 vs. 4.03 1.10），差异有统计学意义（均P＜0.05）。2.各组大鼠血糖变化：干预前，与NGT组比较，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组大鼠2hPG水平均升高（5.96±0.77 vs. 9.69±0.33）（5.96±0.77 vs. 9.26±0.38），差异均有统计学意义（均P＜0.05），FBG水平差异无统计学意义（4.79±0.55 vs. 5.05±0.72）（4.79±0.55 vs. 5.23±0.39）（均P＞0.05）。与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组以上各参数差异无统计学意义（均P＞0.05），(9.69±0.33 vs. 9.28±0.38) (5.05±0.72 vs. 5.23±0.39)。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组大鼠2hPG（10.28±0.38 vs. 7.19±0.34）水平降低，差异有统计学意义（均P＜0.05），FBG水平差异无统计学意义（4.98±0.36 vs. 4.89±0.31）（P＞0.05）。与干预前IGT/NAFLDEx比较，2hPG（9.28±0.38 vs. 7.19±0.34）均降低，差异有统计学意义（均P＜0.05），FBG水平差异无统计学意义（5.05±0.72 vs. 4.89±0.31）（P＞0.05）。3.各组大鼠血脂变化：干预前，与NGT组比较，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组肝脏TG均升高（0.87±0.22 vs. 2.08±0.21）（0.87±0.22 vs. 2.12±0.21），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；TC均增高（0.84±0.19 vs. 1.91±0.16）（0.84±0.19 vs. 2.00±0.17），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；LDL均升高（0.21±0.06 vs. 0.92±0.05）（0.21±0.06 vs.0.93±0.04），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；HDL均降低（1.09±0.06 vs. 0.86±0.07）（1.09±0.06 vs. 0.84±0.08），差异均有统计学意义（均P＜0.05）。与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组以上各参数差异无统计学意义（均P＞0.05）,（2.08±0.21 vs. 2.12±0.21）（1.91±0.16 vs.2.00±0.17）（0.92±0.05vs.0.93±0.04）（0.86±0.07 vs.0.84±0.08）。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组相比，IGT/NAFLDEx组TG，TC，LDL均降低（2.22±0.14 vs.1.06±0.13）、（2.09±0.18 vs.1.02±0.09）（1.04±0.11 vs. 0.25±0.04），HDL增高（0.82±0.06vs.1.05±0.04），差异有统计学意义（P<0.05）；与干预前IGT/NAFLDEx组比较，TG，TC，LDL均降低（2.12±0.21 vs. 1.06±0.13）（2.00±0.17 vs. 1.02±0.09）（0.93±0.04vs. 0.25±0.04），HDL升高（0.84±0.08 vs. 1.05±0.04），差异有统计学意义（P<0.05）。4.各组大鼠肝功变化：干预前，与NGT组比较，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组AST均升高（29.56±8.20 vs. 81.75±8.60）（29.56±8.20 vs. 85.25±5.06），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；ALT均升高（30.22±7.87 vs. 81.75±8.46）（30.22±7.87vs.82.38±7.85），差异均有统计学意义（均P＜0.05）；与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组以上各参数差异无统计学意义（均P＞0.05），（81.75±8.60 vs. 85.25±5.06）（81.75±8.46 vs.82.38±7.85）。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组AST（85.25±7.63vs. 33.25±6.63）、ALT（85.88±4.76 vs. 32.75±6.98）均降低，差异有统计学意义（P<0.05）；与干预前IGT/NAFLDEx组比较水平均降低，（85.25±5.06 vs. 33.25±6.63）（82.38±7.85 vs.32.75±6.98），差异有统计学意义（P<0.05）。5.各组大鼠肝脏CHOP mRNA、CHOP蛋白表达的变化：干预前，与NGT组比较，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组肝脏CHOP mRNA表达均增多（0.15±0.04 vs. 1.06±0.15）（0.15±0.04 vs. 1.09±0.15），差异有统计学意义（均P<0.05）；CHOP蛋白表达均增多（214.59±2.76 vs. 221.11±2.15）（214.59±2.76 vs. 221.25±2.09），差异有统计学意义（均P<0.05）；与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）,（1.06±0.15 vs. 1.09±0.15）（221.11±2.15 vs. 221.25±2.09）。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组CHOP mRNA、CHOP蛋白表达均降低（，1.23±0.12 vs. 0.49±0.12）、（222.65±1.28 vs. 216.40±5.44），差异有统计学意义（P<0.05）；与干预前IGT/NAFLDEx组比较表达均降低，（1.09±0.15 vs. 0.49±0.12）（221.25±2.09 vs. 216.40±5.44），差异有统计学意义（P<0.05）。与NGT组比较表达均增多，（0.18±0.02 vs. 0.49±0.12）（214.57±2.32 vs.216.40±5.44），差异有统计学意义（均P<0.05）。6.各组大鼠肝脏SREBP-1c mRNA表达的变化：干预前，与同期NGT组比较，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组肝脏SREBP-1c mRNA表达均增高（0.17±0.05 vs.4.79±1.37）（0.17±0.05 vs. 5.00±1.23），差异有统计学意义（均P<0.05）；与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组SREBP-1c mRNA水平差异无统计学意义（P>0.05）（,4.79±1.37 vs.5.00±1.23）。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组和干预前IGT/NAFLDEx组比较，IGT/NAFLDEx组肝脏SREBP-1c mRNA表达均降低（5.47±1.23 vs. 0.26±0.10）（5.00±1.23 vs.0.26±0.10），差异有统计学意义（P<0.05）。7.各组大鼠肝组织病理学改变：干预前，NGT组肝脏外观呈红褐色，柔软有弹性，被摸光滑；IGT/NAFLD模型组肝脏体积较NGT组明显增大，外观呈土黄色，肝脏表面散在较多灰黄色颗粒，油腻感，被摸紧张；生理盐水对照干预4周后肝脏形态学未见明显变化。Exendin-4干预4周后肝脏外观呈黄褐色，肝脏表面散在少许灰黄色颗粒。HE染色：干预前，NGT组肝组织结构完整、清晰，肝小叶结构正常，中央静脉大而壁簿，肝细胞索在中央静脉周围呈放射状分布。IGT/NAFLD模型组肝细胞体积明显增大，胞浆内可见大小不一的脂滴空泡，胞核被推向周边。生理盐水干预4周后，IGT/NAFLDNS组肝脏细胞体积明显增大，细胞内可见大量脂滴空泡。Exendin-4干预4周后，IGT/NAFLDEx组肝小叶和肝窦结构清晰，细胞排列整齐，细胞内仅见少许脂滴空泡。8.各组大鼠脂肪变性肝细胞数与总肝细胞数的比值变化：干预前，与NGT组相比，IGT/NAFLDNS组、IGT/NAFLDEx组脂肪变性肝细胞数与总肝细胞数的比值均增高（0.00±0.00 vs. 50.00±11.54）（0.00±0.00 vs. 51.25±11.14），差异有统计学意义（均P<0.05）；与IGT/NAFLDNS组比较，IGT/NAFLDEx组上述指标差异无统计学意义（P>0.05）,（50.00±11.54 vs. 51.25±11.14）。干预4周后，与同期IGT/NAFLDNS组和干预前IGT/NAFLDEx组比较，IGT/NAFLDEx组上述指标均降低（88.50±6.72 vs. 40.38±6.84）（51.25±11.14 vs.40.38±6.84），差异有统计学意义（均P<0.05）；与同期NGT组相比上述指标均升高（0.00±0.00vs. 40.38±6.84），差异有统计学意义（P<0.05）。9.肝脏CHOP mRNA、CHOP蛋白、SREBP-1c mRNA与肝脏脂肪变性程度的相关性分析：IGT合并NAFLD大鼠肝脏CHOP mRNA、CHOP蛋白、SREBP-1c mRNA的表达与脂肪变性肝细胞数与总肝细胞数的比值呈显著正相关（r =分别0.933、0.946、0.978，P＜0.01）。10.肝脏CHOP mRNA与SREBP-1c mRNA的相关性分析：IGT合并NAFLD大鼠肝脏CHOP mRNA的表达与SREBP-1c mRNA的表达呈显著正相关（r =0.923，P＜0.01）。结论1.本研究以高糖高脂饮食饲养Wistar大鼠12周，成功诱发IGT合并NAFLD动物模型，IGT合并NAFLD成模率为80%。2. Exendin-4可以通过降低IGT合并NAFLD大鼠肝细胞CHOP mRNA、CHOP蛋白、SREBP- 1c mRNA的表达，改善内质网应激，而降低肝细胞脂肪变性，具有改善肝细胞脂肪变性的危险因素的作用。