雷公藤内酯醇、沙利度胺对多发性骨髓瘤细胞株及骨髓间充质干细胞作用的对比研究

来源 :浙江中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:magicarpet
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目的观察雷公藤内酯醇、沙利度胺对多发性骨髓瘤细胞株及骨髓间充质干细胞的作用,及对骨髓间充质干细胞细胞因子的表达影响,并进行机制的探讨,为临床应用提供一定的基础。方法1.采用MTT比色法(CCK8)检测多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226、ARP-1及骨髓间充质干细胞的增殖活性;2.Annexin V-FITC/PI双染色,检测细胞凋亡,并采用瑞氏染色法观察细胞凋亡形态学的变化;流式细胞术分析细胞周期的改变;3.RT-qPCR检测经雷公藤内酯醇、沙利度胺作用于骨髓间充质干细胞后IL-6、IL-1p及SCF mRNA的表达;4. Western Blot分析经雷公藤内酯醇、沙利度胺作用于骨髓间充质干细胞后NF-κB/P65蛋白质水平表达;5. ELISA酶联免疫吸附实验测定经雷公藤内酯醇、沙利度胺作用于骨髓间充质干细胞后VEGF的表达。结果1.MTT比色法(CCK8)检测结果显示,雷公藤内酯醇能显著抑制RPMI8226、ARP-1的生长,呈浓度依赖,0-8ng/ml的雷公藤内酯醇处理RPMI8226、ARP-1细胞72h后与空白对照组相比,P<0.001, IC50分别为1.187+0.08ng/ml、0.457±0.13ng/ml.2.雷公藤内酯醇可诱导RPMI8226及ARP-1细胞凋亡并伴有典型的细胞形态学改变。雷公藤内酯醇阻滞RPMI8226、ARP-1细胞周期于S期。3.经雷公藤内酯醇及沙利度胺处理后的骨髓间充质干细胞经qPCR检测,细胞上清液IL-6,IL-1β,SCF的表达均下降,与空白对照组相比,雷公藤内酯醇组P<0.05,沙利度胺组仅IL-6与空白对照组相比P<0.05。4.经VWestern-Blot检测经雷公藤内酯醇处理后的骨髓间充质干细胞其NF-κB/P65表达下降,P<0.05,沙利度胺组无明显差异,P>0.05。5.ELISA检测经雷公藤内酯醇处理后的骨髓间充质干细胞表达的VEGF明显低于沙利度胺组,与空白对照组相比,雷公藤内酯醇组P<0.05,有统计学意义。沙利度胺组P>0.05,无统计学意义。结论1,TPL可直接抑制MM细胞RPMI8226、ARP-1及BMMSCs的生长,呈浓度依赖性,对MM细胞的增殖抑制作用明显强于BMMSCs; 2, TPL可诱导MM细胞RPMI8226、ARP-1及BMMSCs凋亡,呈浓度依赖性,对MM细胞的诱导凋亡作用明显强于BMMSCs;3,TPL可直接杀伤MM细胞,对BMMSCs可能不具有直接杀伤作用,但可影响其分化、表达;减少炎症介质IL-6、IL-1β、SCF、VEGF的表达,改善骨髓造血微环境,进一步抑制MM细胞增殖。4,TPL可能通过抑制NF-κB/P65活性诱导细胞凋亡,抑制肿瘤细胞增殖;
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