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目的:Tim3作为重要的免疫细胞负调控因子,参与调节肿瘤免疫微环境,已有研究证明Tim3在恶性肿瘤细胞上也有表达,并参与调节肿瘤细胞的增殖。然而其在多发性骨髓瘤（Multiple myeloma,MM）细胞的表达及作用机制尚未得到明确阐述。本研究旨在探讨Tim3在MM细胞的表达及其对MM细胞增殖、凋亡的影响,并探讨其潜在相关机制。方法:研究对象为2017年8月至2019年2月就诊于天津医科大学总医院血液科的167例MM患者,分为两组,A组包括88例初治/复发MM患者,B组包括79例治疗后达到非常良好的部分缓解（Very good partial response,VGPR）及以上的MM患者,对照组为51例正常对照。流式细胞术（Flow cytometry,FCM）检测Tim3在MM患者、正常对照组骨髓中CD138+CD38+细胞的表达,并与临床指标进行相关性分析。体外培养MM细胞系（RPMI-8226、U266）,FCM、q RT-PCR方法检测Tim3在MM细胞系的表达。采用Tim3 Si RNA转染的方法降低Tim3在MM细胞系的表达,FCM检测Tim3对MM细胞系凋亡的影响,CCK-8方法检测对细胞增殖的影响,q RT-PCR方法检测NF-κB信号通路相关基因表达的变化,蛋白印迹法（Western blot,WB）方法检测NF-κB信号通路相关蛋白表达的变化。给予Tim3敲低、硼替佐米及两者联合作用于RPMI-8226、U266细胞系,FCM、CCK-8、q RT-PCR、WB方法检测其对MM细胞系细胞凋亡、增殖、NF-κB基因及蛋白表达的影响。结果:1.Tim3在MM患者瘤细胞的表达:Tim3在MM患者瘤细胞的表达率较正常对照组浆细胞显著增高（20.416±12.474%vs.7.665±3.592%,p<0.001）。MM患者中A组表达率较B组显著增高（25.047±14.185%vs.15.257±7.454%,p<0.001）,且两组表达率较正常对照组（C组）均显著增高,p<0.001。A组MM患者中,ISS II期Tim3表达率高于I期（21.023±11.850%vs.13.338±7.505%,p=0.046）,III期表达率高于II期（31.167±14.242%vs.21.023±11.850%,p=0.003）,III期表达率高于I期（31.167±14.242%,21.023±11.850%,p<0.001）。2.Tim3在MM患者瘤细胞的表达与临床指标相关性分析:Tim3表达率与MM患者β2微球蛋白水平、血肌酐水平、髂骨与胸骨浆细胞数呈正相关（r=0.3607,p<0.0001;r=0.1974,p=0.0126;r=0.4435,p<0.0001;r=0.3599,p<0.0001）;与血红蛋白水平、红细胞数呈负相关（r=0.2429,p=0.0018;r=0.1929,p=0.0130）。3.Tim3在MM细胞系的表达:Tim3在RPMI-8226、U266细胞系的表达率均显著高于正常对照组（89.327±1.359%vs.7.665±3.592%,p<0.001;59.263±3.129%vs.7.665±3.592%,p<0.001）,Tim3在RPMI-8226、U266细胞系的相对表达均显著高于正常对照组（49.980±11.382 vs.1.660±1.495,p=0.007;29.673±5.210 vs.1.660±1.495,p=0.018）。4.敲低Tim3对MM细胞系凋亡的影响:Tim3 Si RNA转染24小时后,RPMI-8226细胞系早期凋亡率、总凋亡率均高于阴性对照（NC）组（14.623±1.130%vs.6.420±0.291%,p<0.001;18.823±1.211%vs.8.930±0.477%,p<0.001）,U266细胞系早期凋亡率、总凋亡率也均高于NC组（11.823±1.675%vs.3.430±0.563%,p=0.001;13.860±0.876%vs.4.433±0.615%,p<0.001）。5.敲低Tim3对MM细胞系增殖的影响:敲低Tim3后MM细胞系细胞存活率明显下降,但无明显时间依赖性（p>0.05）。RPMI-8226细胞系转染24、48小时后细胞存活率均明显低于NC组（58.38±1.40%vs.100.00±0.00%,p<0.001;61.11±6.52%vs.100.00±0.00%,p<0.001）,U266细胞系转染24小时、48小时后细胞存活率均明显低于NC组（72.58±1.07%vs.100.00±0.00%,p=0.001;66.88±5.43%vs.100.00±0.00%,p=0.009）。6.敲低Tim3对NF-κB信号通路相关基因及蛋白表达的影响:敲低Tim3后,RPMI-8226、U266细胞系NF-κB信号通路相关基因及蛋白（PI3K、AKT、m TOR、NF-κB）表达均明显下降,p<0.05。7.硼替佐米联合Tim3敲低对MM细胞系凋亡的影响:RPMI-8226细胞系总凋亡率Tim3敲低组（18.823±1.211%）、硼替佐米组（38.610±0.560%）、联合组（49.683±1.201%）均高于NC组（8.930±0.477%）,联合组高于Tim3敲低组、硼替佐米组,p<0.001;U266细胞系总凋亡率Tim3敲低组（13.860±0.876%）、硼替佐米组（43.127±2.644%）、联合组（50.313±1.259%）高于NC组（4.433±0.615%）,联合组高于Tim3敲低组、硼替佐米组,p<0.001。8.硼替佐米联合Tim3敲低对MM细胞系增殖的影响:作用24小时后,RPMI-8226细胞系细胞存活率Tim3敲低组（58.38±1.40%）、硼替佐米组（46.78±7.66%）、联合组（29.74±2.87%）均明显低于NC组（100.00±0.00%）,p<0.001;联合组低于Tim3敲低组（p<0.001）、硼替佐米组（p=0.001）。作用48小时后,Tim3敲低组（61.11±6.52%）、硼替佐米组（35.67±7.14%）、联合组（26.04±3.10%）均明显低于NC组（100.00±0.00%）,p<0.001;联合组低于Tim3敲低组（p<0.001）、硼替佐米组（p=0.049）。作用24小时后,U266细胞系细胞存活率Tim3敲低组（72.58±1.07%）、硼替佐米组（43.43±2.98%）、联合组（34.08±1.43%）均明显低于NC组（100.00±0.00%）,p<0.001;联合组低于Tim3敲低组、硼替佐米组,p<0.001。作用48小时后,细胞存活率Tim3敲低组（66.88±5.43%）、硼替佐米组（32.10±3.64%）、联合组（20.75±5.86%）均明显低于NC组（100.00±0.00%）,p<0.001;联合组低于Tim3敲低组（p<0.001）、硼替佐米组（p=0.013）。9.硼替佐米联合Tim3敲低对NF-κB基因及蛋白表达水平的影响:RPMI-8226细胞系NF-κB基因相对表达量Tim3敲低组（0.32±0.06）、硼替佐米组（0.23±0.07）、联合组（0.08±0.05）均明显低于NC组（1.00±0.00）,p<0.001;联合组低于Tim3敲低组（p<0.001）、硼替佐米组（p=0.007）。U266细胞系NF-κB基因相对表达量Tim3敲低组（0.36±0.02）、硼替佐米组（0.24±0.01）、联合组（0.09±0.01）均明显低于NC组（1.00±0.00）,p<0.001;联合组低于Tim3敲低组、硼替佐米组,p<0.001。RPMI-8226、U266细胞系Tim3敲低组、硼替佐米组、联合组NF-κB蛋白表达均明显低于NC组,联合组低于硼替佐米组。结论:1、Tim3在MM患者瘤细胞高表达,其表达率与MM患者β2微球蛋白水平、血肌酐水平、骨髓浆细胞数呈正相关,与MM患者血红蛋白水平、红细胞数呈负相关,提示Tim3在MM细胞的高表达可能与MM病情进展有关。2、Tim3可能通过NF-κB信号通路调控MM细胞的增殖,下调Tim3可抑制NF-κB信号通路,进而抑制MM细胞增殖,诱导MM细胞凋亡。3、下调Tim3可以增强硼替佐米对MM细胞NF-κB信号通路的抑制作用,进而抑制MM细胞增殖,诱导MM细胞凋亡。