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实验目的:
本课题旨在研究在充血性心力衰竭中,通过使用PDTC(核转录因子NF—κB的拮抗剂,抗氧化剂)干预处理以抑制NF—κB的激活,对心衰大鼠心、肾组织中NADPH氧化酶亚基p22phox表达产生的影响。
实验方法:
山西医科大学实验动物中心成年雄性SD大鼠250-300G共60只,随机分为2大组:心衰组和假手术组(心衰组36只、假手术组24只)。心衰组经开胸行冠状动脉左前降支结扎术制备心衰模型;假手术组不结扎冠状动脉。以两个以上肢体导联出现ST段上抬0.2mv以上并伴有相对应的导联改变,同时肉眼观察结扎区变白为手术成功。心衰组和假手术组再随机各分为2小组(心衰组每组18只,假手术每组12只)即PDTC(吡咯烷二硫甲酸盐)干预组和对照组,PDTC干预组采用饮水口服给药(150mg/kg/day),对照组给予正常饮水。持续四周,然后对大鼠再次称重、麻醉。各组随机选取6只采用导管法进行血流动力学检测并记录肾交感神经放电,多导生理记录仪记录平均动脉压(MAP)、左心室舒张末压(LVEDP)、左心室内压最大上升速率(+dp/dtmax)和左心室内压最大下降速率(—dp/dtmax)。剩余6只经左心室插管至升主动脉用生理盐水及4%多聚甲醛进行全身灌注,灌注结束后,取组织置于4%多聚甲醛固定4小时后移入30%的高糖溶液内待组织沉淀后,冰冻切片行免疫组化染色。
实验结果:
1、血流动力学检测:①心率:心衰对照组与假手术干预组之间差异无统计学意义(>0.05).而其他各组之间差异均有统计学意义(P<0.05);②平均动脉压(MAP)心衰组高于假手术组;在假手术两组之间、假手术干预组与心衰对照组之间差异无统计学意义(P>0.05),其余各组之间均有统计学意义(P<0.05),PDTC干预组后其值均有一定程度提高。;③左心室终末舒张压(LVEDP)与假手术组比较,心衰组大鼠左心室终末舒张压(INEDP)值显著升高,有统计学意义(P<0.05),而PDTC组与心衰对照组比较,LVEDP值明显降低,有统计学意义(P<0.05);④左室内压最大上升速率(LV+dp/dtmax)与左室内压最大下降速率(LV—dp/dtmax)心衰组均低于假手术组,在假手术两组之间差异无统计学意义(P>0.05)其余各组之间均有统计学意义(P<0.05),而PDTC干预后其值均有一定程度提高。
2、免疫组化:假手术组大鼠心肌细胞、肾小管上皮细胞NADPH亚基p22phox表达阴性(一);心衰大鼠心肌细胞、肾小管上皮细胞NADPH亚基p22phox表达呈强阳性(+++);心衰经PDTC干预后NADPH亚基p22phox的表达呈弱阳性(+)。
3、肾交感神经放电:肾交感神经放电在心衰对照组与假手术干预组之间差异无统计学意义(p>0.05);肾交感神经放电在心衰组与假手术组之间的差异有统计学意义(p<0.05);PDTC干预组与心衰组之间的差异也有统计学意义(p<0.05)。
4、血清中丙二醛(MDA)测定:心衰组大鼠血清MDA含量明显升高,与假手术组比较有统计学意义(p<0.05);PDTC干预后血清中MDA含量显著下降,与心衰组比较有统计学意义(p<0.05)
5、心室质量指数及肺质量指数:心衰组大鼠的体重低于假手术组(p<0.05);心衰组大鼠左、右心室质量指数、肺质量指数均高于假手术组、心衰干预组(0<0.05),有统计学意义,说明右心室肥大、肺脏有充血水肿。
结论:
用吡咯烷二硫甲酸盐(PDTC)干预后,通过抑制核转录因子NF—κB的活性,可以改善心衰大鼠心、肾组织中NADPH氧化酶亚基p22pbox的表达。