【摘 要】
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目的:采用基因工程技术大量表达重组幽门螺杆菌(Helicobac ter pylori,H.pylori)鞭毛粘附素(HpaA),用此重组蛋白作为抗原,制备高效价的抗HpaA的鸡蛋黄抗体IgY,为研制H.pylori预防
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目的:采用基因工程技术大量表达重组幽门螺杆菌(Helicobac ter pylori,H.pylori)鞭毛粘附素(HpaA),用此重组蛋白作为抗原,制备高效价的抗HpaA的鸡蛋黄抗体IgY,为研制H.pylori预防性抗体制剂奠定基础。方法:1.诱导重组质粒pQE30-hpaA在大肠杆菌DH5a中表达rHpaA,SDS-PAGE分析其表达形式。2.重组蛋白经Ni2+-NTA树脂纯化后,采用Bradford法测定蛋白浓度。3.用rHpaA免疫30周龄立克体鸡,以水稀释法联合盐析法提取HpaA-IgY,纯化浓缩后用Bradford法测定其含量,SDS-PAGE电泳检测纯度,Western blot鉴定抗原特异性。4. ELISA测定效价和巴氏消毒后的活性。结果:1. SDS-PAGE电泳显示pQE30-hpaA-DH5a表达产物相对分子量为30 000。2. SDS-PAGE分析表达形式,rHpaA主要存在于细菌裂解液上清中,约占70%,部分存在于包涵体中,经Ni2+-NTA树脂对上清进行纯化后,纯度约为90%,Bradford法测得蛋白质含量为0.95mg/ml。3. HpaA-IgY提纯后,Bradford法测得含量为24.6mg/ml,纯度约为90%,Western blot显示在相对分子量30 000处出现单一条带,ELISA效价为1:12800。
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