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研究目的1.探讨成年和老年缺血预处理(ischemic preconditioning, IPC)心肌保护作用的不同及IPC后血管新生作用的差异,IPC后心肌组织中脂联素的表达,明确脂联素与IPC年龄依赖性保护作用减弱的关系及其可能的机制。2.观察脂联素特异小干扰核糖核酸(small interfering ribonucleic acid, siRNA)干预对成年IPC大鼠心肌脂联素蛋白表达和心肌梗死预后的影响,研究抑制脂联素表达对老年大鼠心肌延迟IPC保护作用的影响。研究方法选取成年(4月龄)和老年(18月龄以上)SD大鼠各78只,建立IPC及心肌梗死(myocardial infarction, MI)模型,随机分为5组。IPC组(n=48)：冠状动脉前降支缺血6min再灌注6min,反复4个循环；假手术组(sham)(n=48)：开胸操作同IPC组,但不阻断冠脉血流；AMI组(n=10)：sham组处理后24小时结扎冠状动脉；IPC+AMI组(n=10)：IPC后24小时结扎冠状动脉；空白对照组(control)(n=10)不进行任何处理。对IPC+AMI组、AMI组及control组,于心梗后2周采用M型超声心动图检测左室短轴缩短率(fractional shortening,FS)评价远期心功能,留取心脏采用Masson’s Trichrome染色测量心肌梗死面积。对于sham组和IPC组,分别于IPC术后0h、6h、12h和24h取出心脏(各亚组n=12),用western-blot、 Real Time PCR及免疫组织化学染色方法检测脂联素在心肌组织中蛋白水平和mRNA的表达,并利用大鼠血浆标本做酶联免疫吸附试验,观察循环中脂联素的含量变化。并利用24h缺血心脏冰冻切片进行免疫组化染色,观察毛细血管新生情况。成年SD大鼠60只,随机分入5组：脂联素siRNA+IPC组(n=15),scramble siRNA+IPC组(n=15),生理盐水+IPC组(n=10),脂联素siRNA+IPC+AMI组(n=10)和scramble siRNA+IPC+AMI组(n=10)。各组均于前降支两侧分点局部注射siRNA和转染试剂的混合液或生理盐水,对照组以scramble siRNA(错译siRNA)代替脂联素siRNA.其中前3组大鼠于转染后24h时建立IPC模型,24h后留取10只缺血部位心肌行western blot方法检测脂联素蛋白的表达,另5只留取冰冻切片标本利用免疫组织化学染色法检测局部血管新生情况。后2组大鼠于IPC后24h制作心肌梗死模型,14d后行心功能和心肌梗死面积的检测。研究结果1.与AMI组相比,老年大鼠IPC+AMI组死亡率显著升高,成年大鼠无明显变化。2.成年大鼠IPC+AMI组FS较AMI组明显升高,(33.10%±1.16%vs.23.99%±1.14%,p<0.05),心肌梗死面积显著减小(22.45±2.67%LV area vs.31.73±3.98%LVarea,p<0.05);而老年大鼠则因死亡率较高,无法对心功能及心肌梗死面积进行统计。3.IPC后24h成年大鼠缺血心肌组织中免疫组化染色可见毛细血管染色加深,每平方毫米毛细血管数量显著高于sham组；而老年大鼠二组之间变化不明显。4.IPC后成年大鼠6h和12h时心肌组织中脂联素mRNA和蛋白的表达水平分别较相对应的sham组显著升高(p<0.05),免疫组织化学染色可见缺血区心肌组织局部蛋白表达明显高于非缺血区(p<0.05)；而老年大鼠则相反,IPC后各时间点心肌组织中mRNA和蛋白的表达与sham组无明显差别,免疫组化染色显示局部缺血区蛋白表达较少。5.成年大鼠血浆中脂联素水平在IPC后0h,6h和12h显著升高(Oh：7.40±0.47vs.10.90±1.74；6h：8.18±1.41vs.10.98±1.74；12h：6.97±1.02vs.9.31±0.96,p<0.05)；而老年大鼠血浆中脂联素水平直到24小时才开始升高。6.脂联素siRNA干预抑制了成年大鼠IPC后24h时缺血部位心肌的脂联素蛋白表达。IPC后24h时,脂联素siRNA组大鼠的脂联素蛋白表达明显低于scramble siRNA组及生理盐水组。7.脂联素siRNA转染后,与scramble siRNA对照组相比,FS显著降低(22.42±1.28%vs.31.10±3.05%,p<0.05),心肌梗死面积明显增加(30.17±2.44%LV areavs.22.35±1.29%LV area,p<0.05)。研究结论1.老年大鼠IPC后梗死组死亡率显著升高；而成年大鼠无明显变化,且心功能较单纯梗死组得到改善,提示成年大鼠缺血预处理对梗死心肌有保护作用,而老年大鼠的保护作用钝化。2.成年大鼠IPC后缺血心肌组织中毛细血管新生明显,而老年大鼠则较sham组未见明显毛细血管新生。3.成年大鼠IPC后心肌组织和血浆中脂联素表达均升高,而老年大鼠则变化不明显,提示IPC上调了成年大鼠脂联素的表达,而IPC对老年大鼠脂联素的表达影响不大；这一现象与成年大鼠IPC心肌保护作用及老年大鼠IPC保护作用钝化的差异相对应,提示IPC的心肌保护可能正是通过上调脂联素的表达来发挥作用,而老年大鼠的脂联素表达未明显升高导致心肌保护作用钝化。4.心肌局部注射脂联素siRNA能够成功敲低脂联素的蛋白表达水平5.心肌内特异性敲除脂联素的表达后,成年大鼠IPC后24h心肌缺血区毛细血管新生较scramble+IPC组明显减少,且IPC的心肌保护作用明显减弱,进一步证实脂联素通过促进血管新生参与了IPC的心肌保护作用。研究目的1.探讨冠心病患者血清脂联素与高敏C反应蛋白(hsCRP)水平及心血管危险因素之间的关系,以及血清脂联素与冠心病严重程度的关系；2.探讨急性心肌梗死患者出现前驱心绞痛症状对血清脂联素水平的影响。研究方法收集行冠状动脉造影术的冠心病患者75例,其中急性心肌梗死(AMI)33例,不稳定型心绞痛(UAP)17例,稳定型心绞痛(SAP)25例。健康对照组25例。采用酶联免疫吸附法测定血清脂联素,免疫散射比浊法测定hsCRP,同时分析研究对象的危险因素与脂联素的关系。并分析AMI患者有前驱症状者血清脂联素的浓度。研究结果急性冠脉综合征(ACS)和SAP患者血清脂联素浓度显著低于正常对照组(p<0.05),hsCRP浓度显著高于正常对照组。且ACS组较SAP组血清脂联素更低,而hsCRP水平更高(p<0.05)。ACS患者血清脂联素与hsCRP呈显著负相关(r=-0.6,p<0.05),与TIMI风险评分呈显著负相关(r=-0.332,p<0.05)。CAD患者危险因素越多,脂联素水平越低。AMI患者中有前驱心绞痛症状者较无症状者降低,但差异无统计学意义。研究结论血清脂联素与冠心病的程度及其危险因素相关,与炎性指标呈显著负相关,提示脂联素具有抗炎、抗动脉粥样硬化的保护作用。急性心肌梗死有前驱心绞痛症状患者血清脂联素水平有降低的趋势。