生防菌淡紫拟青霉多糖的分离、纯化及结构分析

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筛选到一株对枯萎病病原菌.尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)具有拮抗抑制作用的淡紫拟青霉(Peacilomyces ilacinus)菌株NH-PL-03,抗性物质初步筛选结果表明其胞外粗多糖具有抑菌活性。本论文对该菌株的胞内、外多糖进行了提取、纯化研究,并对纯化所得的两个单组分多糖IP-1和EP-1进行了结构分析以及抑菌活性测定。主要研究内容与结果如下: l、通过形态学和rDNA-ITS序列分析,鉴定出分离保存的菌株为淡紫拟青霉。对其培养特性进行了研究。 2、淡紫拟青霉发酵液的胞内、胞外物质经过醇析法加乙醇3倍即可得到多糖粗提物。经过测试反应验证,该粗提物为多糖,并具有凝胶多糖的理化特性。进一步的分离实验中,发现经Sevage法脱蛋白3~5次后,可以使淡紫拟青霉粗多糖中的蛋白质含量低于0.62%。脱蛋白后的胞内、外粗多糖经凝胶柱层析纯化后各自得到一个组成分IP-1和EP-1,紫外光谱检测两者已不含蛋白质、核酸等非多糖类物质。纯化后的淡紫拟青霉多糖同样具有凝胶多糖的特性。 3、在对淡紫拟青霉胞内、外多糖IP-1和EP-1的分子结构分析中,证明两者均是以1→3葡萄糖苷键连接的单一单糖组分的无分支结构的多聚葡萄糖;Sephacryl S-200 HR凝胶层析求得IP-1和EP-1样品的平均分子量分别为24.4KD和35.2KD;刚果红结合实验结果表明IP-1和EP-1样品在稀碱溶液中(浓度<0.3mol/L)存在三股螺旋构象。IP-1和EP-1的分子结构为: 其中n可代表聚合度,对于IP-1,其n约为135,对于EP-1,其n约为195。 4、抑菌实验结果表明,淡紫拟青霉的胞内、外粗多糖及其纯化产物IP-1和EP-1均对枯萎病病原菌镰刀菌表现出一定的抑制作用,并随多糖浓度的提高而增强。在显微镜及扫描电镜下观察,均可发现受抑制尖孢镰刀菌产生菌丝局部膨大、消解,胞内物质浓缩、外溢等现象。
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