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本研究采用水蒸气蒸馏和冷压两种方法从琯溪蜜柚果皮中提取精油,分析两种提取方法所得精油在成分及物理性质方面的差异;采用四种体外化学检测法评价琯溪蜜柚精油的抗氧化及自由基清除性能;以琯溪蜜柚精油为受试物,小鼠B16黑色素瘤细胞为研究对象研究琯溪蜜柚精油对小鼠B16黑色素瘤细胞的作用及对其黑色素产生的影响,为进一步扩大琯溪蜜柚精油在食品、药品、化妆品等方面的应用提供依据。全文主要结果如下:1.琯溪蜜柚精油的理化特性及成分分析采用水蒸气蒸馏和冷压法提取琯溪蜜柚精油,对比两种精油的理化指标和成分组成。(1)冷压法精油得率为0.82%,所得精油为浅黄色澄清液体,香气自然清新,相对密度为0.5691,折光率为1.4935;水蒸气蒸馏法精油得率为1.07%,所得精油为无色澄清液体,有浓郁的加热柚皮香味,相对密度为0.8435,折光率为1.4687。(2)冷压油中GC-MS检测出31种挥发性物质,水热油分析出21种。d-柠檬烯、β-月桂烯、罗勒烯、α-蒎烯、β-蒎烯、柠檬醛等在两种提取方法所得精油中均检出,两种方法所提精油也有其特殊标记成分。水热油萜烯化合物总含量高于冷压油,但含氧化合物含量比冷压油低0.54%。冷压法和水蒸气蒸馏法所得精油理化指标相似,品质良好。2.琯溪蜜柚精油抗氧化特性分析选取DPPH自由基清除率、羟自由基清除率、超氧阴离子自由基清除率和总抗氧化性能评价琯溪蜜柚精油的抗氧化特性。结果显示琯溪蜜柚精油具有良好的抗氧化性能,且有浓度依赖效应。其中高浓度精油的羟自由基清除活性和总抗氧化能力高于阳性对照Vc和BHT,羟自由基清除率IC50为0.88 mg/mL。DPPH自由基清除活性和超氧阴离子自由基清除活性虽然低于阳性对照,但也表现出良好的自由基清除活性,IC50 分别为 79.12 mg/mL 和 1.35 mg/mL。3.基于B16黑色素瘤细胞评价体系的琯溪蜜柚精油美白功效(1)低浓度(5 μg/mL)的琯溪蜜柚精油对B16细胞有增殖作用。随着精油浓度增加,细胞存活率明显下降,当琯溪蜜柚精油的浓度达到150 μg/mL时,细胞存活率仅为29.35%(P<0.05)。(2)Hoechst荧光染色观察B16细胞形态变化。随着精油浓度的增加,B16细胞死亡数量逐渐增多,荧光增强,细胞呈现典型的凋亡状态。阳性对照组(曲酸500μmol/mL)细胞死亡较少,荧光较均匀,细胞呈现略微边缘化。(3)采用NaOH裂解法测定琯溪蜜柚精油黑色素抑制率。50μg/mL～150μg/mL浓度范围的精油对B16细胞中黑色素合成表现出明显的抑制作用,且有剂量依赖效应。精油浓度150μg/mL,黑色素生成下降50.28%,比阳性对照(70.53%)低28.71%。(4)ELISA和蛋白免疫印迹技术检测酪氨酸酶(TyrosinaseTyr)蛋白的表达。蜜柚精油对B16细胞Tyr活力的抑制表现出良好的剂量--效应关系,浓度越高,Tyr激活率越小。高浓度的琯溪蜜柚精油Tyr抑制率高于阳性对照曲酸,揭示了琯溪蜜柚精油可能通过抑制Tyr的活性来发挥美白功效。