塞内卡谷病毒（Seneca Valley virus,SVV）是小RNA病毒科（Picornaviridae）,塞内卡病毒属（Senecavirus）的唯一成员。2002年研究学者从人胚胎视网膜细胞（PER.C6）培养物的污染物中分离得到SVV-001,2007年首次报道了猪群SVV感染与猪特发性水疱病（Porcine Idiopathic Vesicular Disease,PIVD）有关,随后陆续在美国、巴西、中国、泰国、哥伦比亚和越南等国家也有SVV感染的相关报道。SVV感染主要引起猪口腔粘膜,鼻吻和冠状水泡和溃疡病变,然后造成跛行,厌食,嗜睡等症状;7日龄内新生仔猪感染SVV的病死率约为30%至70%,时常伴有腹泻症状。SVV的结构蛋白在SVV感染以及产生中和性抗体的过程中起着至关重要的作用,但对于SVV的中和抗体的制备和研究却没有报道。本研究旨在制备SVV全病毒结构蛋白的中和抗体并鉴定出中和表位,为探索SVV基因组结构和功能,和利用中和抗体对SVV进行免疫防治皆有深远意义。本研究以SVV-LNSY01-2017株为研究对象,用该纯化的病毒免疫6周龄的BABL/C雌性小鼠,经过间接ELISA检测小鼠血清显示阳性,进行小鼠脾细胞和骨髓瘤细胞的融合。经过病毒中和试验检测、间接免疫荧光验证、染色体计数以及Western-blot鉴定,成功获得10株对SVV-LNSY01-2017株具有中和作用的单克隆抗体。其中具有较高ELISA效价抗体分别为2C8、3E4、4C3、6D7、6E3、6E5、7C11,检测为低ELISA效价的抗体分别为5A1、5D4、7H7。构建真核表达质粒并通过Western-blot鉴定发现7株高ELISA效价抗体与结构蛋白VP2特异性结合,表明VP2含有中和表位。为了进一步鉴定SVV的抗原表位,首先设计SVV-LNSY01-2017株VP2基因序列的截短片段引物,通过PCR扩增后回收,利用限制性核酸内切酶切开,并将回收后的片段连接到p GEX-KG表达载体上,构建了8个重组表达质粒V1-V8。利用这些质粒做重组蛋白的诱导表达,获得了表达GST和截短蛋白的融合蛋白。Western-blot鉴定显示,8个重组蛋白成功表达,同时7株高ELISA效价抗体共同识别V5（129aa-166aa）和V8（143aa-200aa）截短蛋白,表明中和表位存在于VP2蛋白143aa-166aa之间。接着将此区间继续进行截短表达,通过Western-blot鉴定,最终确定线性中和表位是VP2蛋白153aa-158aa(¹⁵³QELNEE¹⁵⁸)。将序列¹⁵³QELNEE¹⁵⁸与在Gen Bnk下载的26株SVV VP2氨基酸序列对比,中和表位¹⁵³QELNEE¹⁵⁸在不同分离株中高度保守,仅仅在SVA-HLJ-CHA-2016株中存在1个突变位点Q¹⁵³E。通过构建VP2蛋白中和表位的单点突变质粒,利用Western-blot检测出Q¹⁵³、E¹⁵⁴、E¹⁵⁷和E¹⁵⁸是中和抗体的关键性氨基酸位点。总之,本研究成功制备了10株具有中和作用抗SVV-LNSY01-2017株的中和抗体,其中7株抗体特异性识别VP2蛋白,并鉴定出了中和表位位于VP2蛋白¹⁵³QELNEE¹⁵⁸,并找出了4个关键性氨基酸位点,有助于进一步研究SVV基因组的结构和功能。