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金线莲(Anoectochilus roxburghii(Wall.)Lindl),兰科开唇兰属多年生草本植物,是我国物博品珍的中药材库中的重要一员,有极其广泛的药用价值,被誉为药材中极物的“药王”。(1)金线莲植物组织培养体系的建立为了更好的了解组培中各影响因子对金线莲生长增殖的影响,优化金线莲的组培条件,以为金线莲的工厂化生产提供理论依据,本实验以来自福建和台湾两地的两大类金线莲为实验对象,试验植物激素6-BA,NAA,IBA及有机添加物质香蕉泥,马铃薯泥对金线莲生长增殖的影响。结果发现,在分裂增殖阶段,各实验因子的影响力大小为:6-BA>NAA>IBA>有机添加物;而在生长增殖阶段,各试验因子的影响力大小为:有机添加物>IBA>NAA>6-BA,充分说明了金线莲不同生长阶段对培养基的营养成分要求不尽相同,对指导金线莲组培有一定的参考价值,而就该实验的研究来看,应该选择较粗壮的金线莲茎杆作为外植体进行组培扩繁,原球茎和丛芽诱导培养阶段较佳培养基配方是:台湾金线莲:6-BA4mg/L+NAA0.2mg/L+MS;福建金线莲:6-BA2mg/L+NAA0.1mg/L+MS。增殖培养阶段较优培养基配方是:台湾金线莲:6-BA 2mg/L+NAA 0.1mg/L+MS;福建金线莲:6-BA 1mg/L+NAA 0.1mg/L+MS。生根培养阶段较佳培养基配方是:NAA 0.1mg/L+1/2MS+60-80g/L 香蕉泥。(2)金线莲ISSR-PCR引物的筛选为了能够探索金线莲同属品种之间的亲缘关系及同种植物不同产地的遗传变异,制定正品金线莲的DNA指纹图谱,并鉴别银线莲、斑叶兰等相近植物,本文应用ISSR-PCR技术对采自福建漳州,广东广西,福建南靖,台湾,越南的不同金线莲及云南和福建的银线莲进行了鉴定,并从78条UBC Primer中筛选出9条UBC primers对28个金线莲样品共扩增出100个位点,其中多态性的位点有93个(93%),体现了品种之间较高的遗传多样性,另外,根据本实验的ISSR分析结果,这28个金线莲样品可以被聚类成4类,而根据表观生物学性状的差异,也可以将这28个金线莲样品粗略的分成4类,然而,这两种途径的分类结果并不大一致,因此,可以大概推断,金线莲的遗传差异不仅仅是基因控制,也应该受到生长环境及继代次数的影响。另外,通过对ISSR-PCR产物的回收、克隆及测序,我们得到了 9个经NCBI比对可以初步确定是金线莲中特有的含有AG,TC,GAA,CTT,GATA,CTAT重复序列的新的DNA片段,并得到了 3条能够特异鉴别金线莲和银线莲的ISSR引物。(3)金线莲cpSSR引物的筛选为了能够结合SSR优点及植物叶绿体DNA的优点,开发出金线莲植物叶绿体微卫星引物(cpSSR),本实验以龙岩金线莲,漳州金线莲及台湾金线莲三个品种为研究对象,分别对三个品种的金线莲叶绿体DNA测序,测出三个品种的金线莲叶绿体DNA大小分别约为135kb,154kb,215kb,和普通高等植物的叶绿体DNA序列大小相差不大,另外,我们再对测得的金线莲cpDNA全序列进行cpSSR位点统计分析,结果表明:金线莲叶绿体DNA中有较多二核苷酸和三核苷酸重复的SSR序列。最后根据测序结果设计了 31对cpSSR引物,经过优化PCR验证筛选后发现,其中有25对引物能够在供试金线莲样品中扩增出目的条带,表现出了引物的通用可行性,且有3对引物能够在金线莲植物中扩增出稳定的目的条带而在银线莲及斑叶兰中则不能扩增出相同的目的条带,表明了这3对引物适用于鉴别金线莲和银线莲及斑叶兰,有望开发成分子标记的引物,用于金线莲的质量监控。