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随着环境的变化,高脂饮食和人口老龄化等原因,在我国前列腺癌的发病率由2003年的6.53/10万,上升至2009年的9.92/10万,升高了51.91%,呈逐年上升趋势。目前,前列腺癌根治术被视为器官局限性前列腺癌局部治疗的金标准。此外还有内分泌治疗、化疗以及放疗。前列腺癌早期并无明显的临床症状,前列腺癌的诊断主要依靠前列腺特异性抗原PSA(prostate-specific antigen,PSA)和直肠检查(digital rectal examination,DRE)的检查方法。局限性的前列腺癌患者5年生存率几乎可达100%,但当发生远处转移后其生存率可下降为29%,其一旦发生不仅影响预后且影响着病人的生活质量。肿瘤的转移是恶性肿瘤的重要生物学特征之一,近年来,恶性肿瘤的复发转移影响患者的预后与治疗,大多数患者并非是死于原发肿瘤,而是死于肿瘤转移后所形成的转移癌。随着人们对与肿瘤转移相关基因的不断深入研究,发现了Ras(Ras superfamily,Ras)和Myc基因家族(myelocytomatosis viral oncogene,Myc)和突变型P53基因(protein 53,P53)的异常表达可能和肿瘤的转移有相关性。另外,有研究证明,如果把很多癌基因转染成恰当的受体细胞则可以诱发转移表型的生成。在对Rho(Ras homolog gene family,Rho)家族逐渐深入的研究中,一种名为“依赖Rho A(Ras homolog gene family,member A,Rho A)的侵袭媒介”(Mediator of Rho A-dependent invasion,MRI1)的未被鉴定基因,又称其为MRI1基因。从未在人类特征数据具有明显的特点,它经常被认为是一个假设蛋白质。它的命名基于其响应于Rho A的感应并具有促进依赖Rho A细胞侵袭和细胞运动的特征,并且为Rho A的FAK(Focal Adhesion Kinase,FAK)的酪氨酸磷酸化的调节提供了一种新的方法。其具有双重功能,一个是其具有催化活性,另一个是其作为一个效应信号参与癌细胞的侵袭、转移。以往的研究显示,MRI1基因可能与恶黑、卵巢癌、乳腺癌等肿瘤的转移相关。但是其与前列腺癌的关系如何,国内外以往的报道较少。目的:本研究中我们检测对前列腺癌细胞、沉默MRI1基因后前列腺癌细胞中的MRI1基因及其对应蛋白表达情况。并通过细胞转染,观察沉默MRI基因后对前列腺癌细胞细胞迁移力的影响,探讨MRI1基因在前列腺癌细胞转移中的作用。材料方法:1、研究对象:人前列腺癌细胞系——PC3(protate cancer cell 3,PC3),购自ATCC(American type culture collection),细胞用含10%胎牛血清的RPMI1640培养液在37℃、5%CO2及饱湿度条件下培养。2、实验分组:分为三组,第1组为空白对照组(CTL组)为不做任何处理的前列腺癌细胞,第2组为阴性对照组(NC组)为加入慢病毒空载体转染,第3组为实验组(sh-1、sh-2、sh-3、sh-4、sh-5组)特异性沉默MRI1基因。3、实验方法:采用慢病毒载体来特异性靶向沉默MRI1基因的表达,利用实时荧光定量PCR技术及western blot检测前列腺癌细胞中MRI1基因及蛋白表达情况。并运用划痕实验检测前列腺癌细胞和沉默MRI1基因后前列腺癌细胞的迁移能力。4、数据处理:应用SPSS 19.0统计软件,各不同处理后的前列腺癌细胞中的MRI1基因的相对表达值,采用独立样本的T检验进行分析,比较各组前列腺细胞迁移能力水平,采用方差分析。检验水准α=0.05。结果:1.实时定量PCR结果显示,MRI1基因在前列腺癌细胞中表达,实验组中MRI1基因沉默有效,与CTL组相比MRI1基因的表达出现明显的下降(P<0.05)。2.蛋白印迹结果表明:内参蛋白Vinculin条带整齐,表明所有样本蛋白浓度是一致的。与两对照组蛋白表达相比,实验组蛋白表达明显降低。3.划痕实验结果表明:8h后实验组划痕宽度最终划痕宽度明显大于CTL组,我们将实验细胞爬行的宽度进定量分析,发现沉默MRI1基因后的前列腺癌细胞的迁移能力被显著抑制(P<0.05)。结论:MRI1过表达可能与前列腺癌转移密切相关,沉默MRI1基因,可有效降低前列腺癌的转移,对寻找转移性前列腺癌的治疗有一定的指导作用。