胃癌在我国乃至全球是最为常见的恶性肿瘤之一，在我国死亡率在各种恶性肿瘤中占首位，但其肿瘤发生和进展的机制尚不十分清楚。有证据显示，雌激素参与了胃肿瘤形成，但是雌激素参与胃癌的机制尚未明确。雌激素通过其特异性受体即雌激素受体（estrogen receptor，ER）起作用。目前已发现两种ER，即ERα和ERβ。雌激素受体是属于核受体超家族成员的受配体调节的转录因子，广泛存在于两性动物体内，在全身各组织分布广泛，存在于不同组织或同一组织，介导许多重要的生理学反应，同时也参与一些对雌二醇有反应的肿瘤的生长。但目前尚缺乏ERα和ERβ在胃癌组织局部表达的联合检测及其与病理资料相关性的研究。胸腺素α原（Prothymosin alpha，ProTα）是一种天然无结构、强酸性小分子蛋白质，具有高度遗传保守性，含量丰富，存在于所有哺乳动物组织中，其生理功能尚未澄清。唯一确定的是ProTα与细胞增殖相关，是细胞生长和存活不可缺少的条件。近来发现，ProTα还与细胞凋亡相关。由于肿瘤与细胞无限增殖与凋亡异常相关，因而ProTα在肿瘤进展中的作用成为研究焦点。目前，有报道提出，ProTα可作为结肠癌、肝癌、乳腺癌等肿瘤的标志物。但目前对于ProTα在胃癌中的表达及其生物学意义尚未见报道。针对ERα、ERβ和ProTα与胃癌的关系，我们进行了以下匹部分实验研究：第一部分雌激素受体亚型α、β和胸腺素Q原在人胃腺癌组织中表达的临床意义目的：检测雌激素受体亚型ERα、ERβ和ProTα蛋白在胃腺癌组织中的表达状况及其与临床病理的联系，探讨其在胃腺癌的发生发展中的作用及其临床意义。方法：使用免疫组化（immunohistochemistry，IHC）方法，对39例福尔马林固定的石蜡包埋的胃腺癌患者的癌组织及其癌旁非癌组织的ERα、ERβ亚型和ProTα蛋白进行检测，20例正常胃粘膜作为对照。进一步使用计算机辅助的Image Pro-plus 4.5程序行IHC蛋白表达定量研究。结果：①ERα在癌组织中呈阳性表达，在正常组织中无表达。②ERβ在部分癌及其非癌组织表达，但ERβ阳性率及表达模式不同。与配对的非癌组织相比，部分癌组织发生了ERβ表达减少或丢失。高中分化腺癌的ERβ阳性率明显高于低分化腺癌（P=0.041），丢失的ERβ仅见于低分化腺癌。定量分析显示，癌组织的ERβ平均水平显著低于其对应的癌旁组织（P=0.004）。而且，有淋巴转移者ERβ水平更低，仅是淋巴转移阴性者的1／8（P=0.036）。③ProTα在癌组织及其癌旁非癌组织上皮细胞普遍表达，癌组织中ProTα表达明显高于其癌旁组织和正常对照胃组织。ERβ阳性胃癌组织的ProTα平均表达水平高于ERβ丢失者。结论：与正常组织对照，ERα和ERβ表达在胃腺癌组织中发生了改变，证实ERα和ERβ在胃腺癌的发生发展过程起作用，可作为识别某些胃腺癌发生发展的标志物；ERα是癌组织特有的且在低分化腺癌中更为常见，说明ERα与某些胃腺癌的发生相关，阳性表达者预后差；降低的ERβ表达与胃癌的去分化有关，同时也提示ERβ阳性胃腺癌可能比ERβ表达丢失者预后好；显著降低的ERβ蛋白水平与胃癌恶性特征，如淋巴转移相关；ProTα蛋白水平可以作为监测胃腺癌发生的标志物，同时也提示ERα、ERβ和ProTα可作为胃癌治疗靶点。另外，进展期胃癌中降低的ERβ表达和增高的ProTα表达提示，ERβ在胃上皮组织很可能具有一种与ProTα相反的生理作用。第二部分ERα和ERβmRNA在人胃腺癌中的表达目的：检测ERα、ERβmRNA的在原发性胃腺癌患者的癌组织及其癌旁非癌组织的存在状况并探讨胃癌中两型ER表达发生改变的可能机制。方法：用特异性ERα和ERβ引物，经反转录聚合酶链式反应（Reverse transcription-PCR，RT-PCR）法检测癌组织及其癌旁非癌组织可能的ERα、ERβmRNA表达。以GAPDH光密度作为标准，用图像分析软件LabworksTM分析ERα和ERβ信号，进行半定量分析。结果：ERα和ERβmRNA在胃癌和癌旁胃粘膜组织中均有表达。ERβmRNA表达率高于ERα。ERαmRNA比率与肿瘤浸润深度相关（P=0.004）。然而，定量分析显示，胃癌和癌旁胃粘膜组织中ERα和ERβmRNA的表达在量上变化不定，未发现统计学差异。结论：ER阳性胃腺癌中，ERα和ERβ在基因转录水平上与蛋白水平有所不同，尤其是ERα，可能是通过转录后和翻译后机制起作用。第三部分17β-雌二醇和三苯氧胺对人胃腺癌细胞生长和ProTα转录的影响目的：研究胃癌细胞是否可作为17β-雌二醇（estradiol，E₂）及其拮抗剂三苯氧胺（tamoxifen，TAM）作用的靶细胞；检测E₂及其拮抗剂TAM对胃癌细胞BGC-823 ProTαmRNA表达的影响，探讨TAM在胃癌治疗中的作用。方法：我们用RT-PCR和免疫细胞化学（immunocytochemistry，ICC）测定两株源于中国人胃腺癌细胞（SGC-7901和BGC-823）的ERα和ERβ的表达。分别观察不同浓度的E₂和TAM对细胞生长速度和细胞形态学的影响。用MTT测定细胞存活率，Hoechst 33258染色（法）检测细胞调亡。用半定量RT-PCR检测不同浓度的E₂和TAM对人胃腺癌BGC-823细胞ProTα基因表达的变化。结果：①SGC-7901和BGC-823均有ERα表达。在BGC-823还检测到ERβ表达，但较ERα水平为低。②E₂可促进2株胃癌细胞的生长，但与人乳腺癌细胞不同，MCF-7对低浓度（1nM）的E₂反应，而胃癌细胞主要在较高剂量（10nM）显著增长（P＜0.05）。TAM对SGC-7901和BGC-823有生长抑制及诱导凋亡作用（P＜0.05）。有趣的是，BGC-823在较低剂量（相对于SGC-7901）出现凋亡。③10nM E₂促进BGC-823细胞的生长同时伴ProTαmRNA水平增高（P＜0.05）。TAM对BGC-823有生长抑制及诱导凋亡作用，同时伴有ProTαmRNA表达水平下降（P＜0.05）。结论：E₂和TAM能够影响ERα（和ERβ）阳性胃癌细胞生长。SGC-7901和BGC-823的生长具有雌激素依赖性，可能与其ERα阳性特征有关。TAM在体外对这两种胃腺癌细胞有抑制作用，这种抑制不仅通过抑制ERα，可能还通过ERβ起作用。E₂和TAM能够通过ProTα直接／间接作用影响ERα和ERβ阳性胃癌细胞生长。第四部分反义ProTα基因转染对人胃癌细胞株BGC-823的影响目的：观察反义人ProTα基因转染胃癌细胞株BGC-823后对其体外生长的抑制作用。方法：应用人工合成的ProTα反义寡核苷酸（ProTα-AS-ODN），以阳离子聚合物转染法转染体外培养的人胃癌细胞BGC-823，以正义寡核苷酸和未转染组为对照，应用RT-PCR及ICC方法分析ProTα基因及其蛋白的表达，MTT法分析细胞生长抑制作用，Hoechst 33258检测细胞凋亡。结果：RT-PCR、ICC显示ProTα-AS-ODN转染组ProTαmRNA及其蛋白的表达显著减少，MTT检测表明ProTα-AS-ODN转染组活细胞数较其它各组均低（P＜0.05），Hoechst 33258则显示其凋亡细胞数较其它各组明显增高（P＜0.01）。结论：ProTα-AS-ODN成功转染人胃癌细胞BGC-823且可封闭ProTαmRNA，使已转染的人胃癌细胞ProTα蛋白的表达减少，且可抑制人胃癌细胞的增殖。总之，本研究的结果表明，ERα和ERβ可能与人类胃腺癌的发生发展相关，而且ERα和ERβ的表达还与胃腺癌的分化程度和临床进展有关，可以作为新的有价值的分子标记物以协助判断胃癌的发生分化和进展程度及评价预后；ProTα的平均水平从正常粘膜到胃癌细胞呈进行性增高，提示ProTα的高表达可能与胃癌发生有关而与肿瘤进展无关。因此，ERα、ERβ和ProTα在胃腺癌的诊断中将发挥重要作用。我们的体内外实验证实，ERα、ERβ和ProTα将可能成为重要的临床胃癌治疗新靶点。