肌萎缩性侧索硬化(amyotrophic lateral sclerosis，ALS)累及侵犯上、下运动神经元，临床表现为肌无力、肌束颤动、肌肉萎缩，腱反射亢进等症状，最终往往因吞咽困难和呼吸肌无力而死亡。目前国际上缺乏有效的治疗。中医药在此疾病上的治疗有其独特的优势。本课题从临床观察和动物实验两部分进行研究，观察加味四君子方对肌萎缩侧索硬化的神经保护作用。　　第一部分 加味四君子方治疗肌萎缩侧索硬化脾虚证的临床疗效研究　　目的:客观评价中药加味四君子方改善肌萎缩侧索硬化患者的生活功能、延缓肌萎缩侧索硬化疾病发展的可能性。　　方法:本研究采用随机、双盲、安慰剂对照的临床试验设计。50例肌萎缩侧索硬化患者随机分为治疗组和对照组。治疗组在西医基础治疗上加用加味四君子方，治疗组在西医基础上加用安慰剂，服药9个月，每3个月记录一次，观察12个月。主要观察指标:《改良肌萎缩侧索硬化功能评分量表(ALSFRS-r)》、次要观察指标:中医症候《肌萎缩侧索硬化中医脾虚症状轻重　　程度评分标准》。　　结果:1、45例患者纳入统计，治疗组和对照组年龄、性别、病程、服用利鲁唑、ALSFRS-r评分、脾虚症状评分的基线水平一致，无统计学差异(p＞0.05)。2、通过对中医脾虚症状评分、ALSFRS-r总分统计结果显示加味四君子方组与安慰剂组两组之间有显著性统计学差异(p＜0.05)，可以认为随着时间的发展，两组治疗效果有所不同，特别是在中医脾虚症状方面，能有效延迟加味四君子方组相关症状的恶化，治疗效果较为明显。构成ALSFRS-r症状总分的粗大运动、精细动作两个方面的评分的时间级别广义方程分析，显示加味四君子方组与安慰剂组两组之间有显著性统计学差异(p＜0.05)，可以认为随着时间的发展，两组治疗效果有所不同。但在延髓症状、呼吸症状这两个方面的评分的时间级别广义方程分析，两组效果相似，没有统计学差异（p＞0.05）。　　结论:加味四君子方可以延缓肌萎缩侧索硬化神经功能恶化，在粗大动作、精细动作有良好的疗效。　　第二部分 加味四君子方对肌萎缩侧索硬化转基因小鼠模型的神经保护作用　　目的:观察加味四君子方对SOD1G93A转基因小鼠生存期、神经行为功能改变、神经肌肉组织结构的影响，并通过免疫组织化学方法和免疫印迹的方法检测脊髓和前根神经异常磷酸化神经丝的表达和分布，从而阐明加味四君子方对肌萎缩侧索硬化的神经保护机制。　　方法:1、动物分组及给药方法:将SOD1G93A转基因肌萎缩侧索硬化模型小鼠随机分为3组:肌萎缩侧索硬化模型组、加味四君子方治疗组、利鲁唑治疗组。　　加味四君子方组:肌萎缩侧索硬化造模后小鼠，给予10 g中药/kg体重/天;利鲁唑治疗组:肌萎缩侧索硬化造模后小鼠，给予Riluzole30mg/kg/天;对照组:肌萎缩侧索硬化造模后小鼠，给予加味四君子方组等体积的生理盐水。　　2、生存期和神经行为学:观察各组发病时间、死亡时间、转棒时间。　　3、通过HE染色，观察各组小鼠的脊髓、神经、腓肠肌肌肉的组织形态。　　4、免疫组化和免疫印迹法对异常磷酸化神经丝及其蛋白水平进行观察。　　结果:1、与安慰剂（生理盐水）相比，加味四君子组及利鲁唑组分别推迟了发病时间7天和8天，延长生存期10天和10.3天。与生理盐水组相比，p值均＜0.001，均有统计学意义。加味四君子方组与利鲁唑组发病时间和生存时间比较，两组间没有显著性差异。　　2、从12周到17周，加味四君子方组及利鲁唑组明显延长了小鼠的转棒时间，与生理盐水组相比，有显著的统计学差异，而加味四君子方组与利鲁唑组两组小鼠各时期运动时间无显著性差异。　　3、HE染色后的阴性对照组、生理盐水组、加味四君子组、利鲁唑组的脊髓、神经和肌肉的组织学形态，结果显示生理盐水组的脊髓组织切片可见神经细胞减少、肿胀、胶质细胞增生;加味四君子方组和利鲁唑组见神经细胞变形、排列紊乱，胶质增生不明显。前根神经组织切片经HE染色后，生理盐水组可见神经纤维断裂，神经细胞变形，神经轴索变细，加味四君子方组见部分神经纤维断裂，部分神经细胞水肿，利鲁唑组可见神经细胞排列紊乱，部分神经纤维断裂。腓肠肌肌肉经HE染色后，生理盐水组可见肌节排列紊乱、肌纤维坏变、核聚集和核变形;加昧四君子方组可见肌细胞排列紊乱，肌横纹模糊，部分肌纤维萎缩，细胞变形;利鲁唑组可见细胞聚团现象，肌横纹模糊，部分肌细胞变形。　　4、免疫组化显示加味四君子方组和利鲁唑组的脊髓前角、前根神经SMI-32阳性神经元数量较阴性对照组少，但较生理盐水组多具有统计学意义(p＜0.05)，SMI-31阳性神经元数量较阴性对照组多，但较生理盐水组少，具有统计学意义(p＜0.05)，　　5、免疫印迹SMI-31免疫印迹的结果显示，生理盐水组SMI-31的表达水平明显高于阴性对照组，加味四君子方组和利鲁唑组的表达水平低于生理盐水组，明显高于阴性对照组，其结果与免疫组化结果一致。　　结论:加味四君子方和利鲁唑均具有延迟SOD1G93A转基因肌萎缩侧索硬化模型小鼠发病时间的作用，且两组延长生存期和运动功能的作用相当。中药加味四君子方可能通过抑制神经丝的异常磷酸化，减少异常磷酸化的神经丝在核周异常聚集，从而维持细胞骨架的完整性，减轻轴索萎缩，改善轴浆运输，延缓神经元变性，发挥其神经保护作用。