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目的:1.观察电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠神经功能恢复的影响;2.探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质缺血区CD34~+微血管、CD34~+VEGFR2~+血管密度和脑梗死体积的影响;3.探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质缺血区AKT、p-AKT、mTOR、p-mTOR、P70S6K、p-P70S6K蛋白表达的影响;4.探讨电针对局灶脑缺血/再灌注大鼠大脑皮质缺血区MMP-9、VEGF、HIF-1α蛋白和基因表达的影响;5.探讨电针及RAPA干预对AKT/mTOR/P70S6K信号通路活化的影响,初步确定电针促进大脑皮质缺血区血管再生的机制。方法:180只雄性成年SD(Sprague-Dawley)大鼠随机分为4组:假手术组(Sham)、模型组(I/R)、电针组(I/RE)和RAPA+电针组(抑制剂组,I/RER)。采用改良线栓法制备SD大鼠右侧局灶脑缺血/再灌注(MCAO/R)模型。根据局灶脑缺血2 h后再灌注的时间,将每个组各分为再灌注12 h、1 d、2 d、3 d和7 d五个亚组。电针刺激大鼠“百会”穴(GV 20)和左侧“四关”穴(合谷LI 4/太冲LR 3),每次刺激30 min,每日1次。Garcia18分制神经功能评分体系评估神经功能恢复情况。TTC染色检测局灶脑缺血再灌注7 d后各组脑梗死体积。免疫组织化学染色检测脑缺血再灌注3 d、7 d后各组别大脑皮质缺血区CD34~+微血管的表达。免疫荧光双标法测定再灌注7 d后各组大鼠大脑皮质缺血区CD34~+VEGFR2~+血管表达。Western Blot检测大脑皮质缺血区AKT/mTOR/P70S6K和VEGF/HIF-1信号通路相关蛋白的表达。qRT-PCR检测大脑皮质缺血区HIF-1/VEGF信号通路相关mRNA表达。qRT-PCR和免疫组织化学染色分别检测大脑皮质缺血区MMP-9 mRNA和阳性细胞的表达。结果:1.各组不同时间点大鼠神经功能评分在模型组、电针组和抑制剂组中,随着时间延长神经功能评分逐渐增加,但是在再灌注12 h、1 d和2 d后并没有显著差别。与模型组相比,电针组在再灌注3 d和7 d后神经功能评分显著增高(P<0.01)。电针组3 d和7 d时间点神经功能评分比抑制剂组高(P<0.05)。2.电针对再灌注7 d后各组大鼠脑梗死体积的影响与模型组相比较,再灌注7 d后电针组脑梗死体积显著减少(P<0.01)。与电针组相比较,再灌注7 d后抑制剂组脑梗死体积明显增多(P<0.01)。3.电针对再灌注3 d和7 d后各组大鼠大脑皮质缺血区CD34~+微血管的影响与假手术组相比,模型组7 d CD34~+微血管密度增加(P<0.05);与模型组相比,电针组3 d和7 d CD34~+微血管数目明显增加(P<0.01);使用抑制剂RAPA后,抑制剂组与电针组相比,CD34~+微血管的密度减少(P<0.05)。4.电针对再灌注7 d后各组大鼠大脑皮质缺血区CD34~+VEGFR2~+血管的影响与模型组相比较,再灌注7 d后电针组中CD34~+VEGFR2~+血管明显增加(P<0.01)。与电针组相比,抑制剂组中CD34~+VEGFR2~+血管减少(P<0.01)。5.电针对局灶脑缺血/再灌大脑皮质缺血区AKT/mTOR/P70S6K信号通路的影响与假手术组相比,模型组中p-AKT的表达在再灌注12 h后无明显改变,在再灌注1 d、2 d和3 d后表达增加(P<0.05),在再灌注2 d后达到高峰;与模型组相比,电针组中各时间点p-AKT的表达从12 h开始明显增加并持续到再灌注7 d后仍维持在较高的水平(P<0.001);与电针组相比,抑制剂组中各时间点p-AKT的表达明显降低(P<0.01)。与假手术组相比,模型组组中p-mTOR和p-P70S6K的表达在再灌注2 d、3 d和7 d后增加(P<0.05),在3 d达到高峰;与模型组相比,电针组中各时间点p-mTOR和p-P70S6K的表达明显增加(P<0.001);与电针组相比较,抑制剂组中各时间点p-mTOR和p-P70S6K的表达降低(P<0.01)。6.电针对脑皮质缺血区MMP-9 mRNA和阳性细胞的影响表达与假手术组相比,模型组中各时间点MMP-9 mRNA的表达增加(P<0.001),在再灌注3 d后达到高峰。与模型组相比,电针组中MMP-9mRNA表达在再灌注1 d后减少(P<0.05)但是在再灌注3 d和7 d后明显增加(P<0.01)。与电针组相比,抑制剂组中每个时间点MMP-9mRNA的表达均减少(P<0.01)。假手术中有少量的MMP-9阳性细胞。与假手术组相比,模型组中各个时间点MMP-9阳性细胞均增加(P<0.001),在再灌注7 d后达到高峰。与模型组相比,电针组中MMP-9阳性细胞在再灌注1 d后减少(P<0.05)但是在再灌注3 d和7 d后明显增加(P<0.01)。抑制剂组中MMP-9阳性细胞比电针组MMP-9阳性细胞明显减少(P<0.01)。7.电针对局灶脑缺血/再灌后大脑皮质缺血区VEGF/HIF-1信号通路的影响与假手术组相比,模型组中HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达均增加(P<0.01);与模型组相比较,电针组中HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白的表达显著增加(P<0.001);与电针组相比较,抑制剂组中HIF-1α、VEGF mRNA和蛋白表达降低(P<0.01)。结论:1.电针能促进局灶脑缺血/再灌注大鼠神经功能的恢复;2.电针能激活AKT/mTOR/P70S6K和VEGF/HIF-1信号通路;3.电针治疗能增加脑皮质缺血区CD34~+微血管和CD34~+VEGFR2~+血管的密度,减少脑缺血区脑梗死体积;4.电针可能通过激活AKT/mTOR/P70S6K信号通路促进MMP-9介导的血管再生、减少梗死体积和促进神经功能缺失的恢复,从而减轻脑缺血引起的脑损伤。