【摘 要】
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日本血吸虫病(Schistosomiasis japonicum)是一种严重危害人类身体健康、影响经济和社会发展的人畜共患寄生虫病。不同发育阶段的血吸虫虫体在蛋白表达、生理生化特征等方面
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日本血吸虫病(Schistosomiasis japonicum)是一种严重危害人类身体健康、影响经济和社会发展的人畜共患寄生虫病。不同发育阶段的血吸虫虫体在蛋白表达、生理生化特征等方面都存在一些差异。血吸虫童虫是血吸虫在终宿主体内发育的早期阶段,一些童虫差异表达蛋白可能对血吸虫生长发育至关重要。本研究应用蛋白质组学技术分析、研究血吸虫童虫差异表达蛋白,克隆和表达了血吸虫童虫差异表达蛋白烯醇酶SjEnol基因,为研制抗感染的分子疫苗、诊断抗原、新治疗药物提供基础。 本研究应用双向电泳技术对日本血吸虫(中国大陆株)童虫(16日龄)和成虫(雌、雄虫,40日龄)虫体可溶性蛋白进行了分离,应用image—master软件分析童虫、雌虫和雄虫的双向电泳图谱,显示两个不同发育时期虫体在可溶性蛋白组分上分别分离到2000±69、1100±75和1310±18个蛋白斑点,这些蛋白斑点大部分在Mr 10～80 KD、pI 3～8的电泳图谱区域,其中童虫蛋白电泳图谱中呈现26±2个不同于成虫的特异表达蛋白斑点。 从童虫期差异表达的蛋白斑点中选取10个对比性最强的蛋白斑点进行质谱鉴定,结果成功地获得了其中5个蛋白斑点的肽指纹图谱检测数据,进一步通过MASCOT、ProFound和Scope等软件查询数据库对目标蛋白进行鉴定。结果表明这些差异表达蛋白主要参与蛋白信号转导、能量代谢、转录、翻译调控和作为细胞构架蛋白等。 基于日本血吸虫期别差异表达蛋白质组的研究分析结果,选择一个童虫差异表达的蛋白分子进行深入研究,通过质谱(ESI)分析鉴定得到该蛋白质的部分氨基酸序列,利用RACE、PCR技术克隆出该目的蛋白编码基因,其ORF的核苷酸序列有1305bp,推测编码434个氨基酸,同源分析表明该蛋白为日本血吸虫烯醇酶(SjEnol)。构建了原核表达质粒pET28 a(+)
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