钾离子通道Kv1.3在钛离子影响T细胞内钙离子浓度的作用研究

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目的:通过观察钛离子与T细胞作用后细胞膜电位、胞内钙离子变化及Kv 1.3通道表达情况之间的关系,探讨Kv 1.3通道在钛离子影响T细胞内钙离子浓度中的作用。方法:1、体外培养Jurkat T细胞,MTT法检测不同浓度Kv 1.3通道阻滞剂Sh K-Dap22对T细胞增殖活性的影响。2、根据是否用植物血凝素PHA活化将Jurkat T细胞分为PHA(+)及PHA(-)两个大组,两组细胞按加入钛离子浓度的不同分别设立对照组、低、中及高浓度组,相对应以0μmol/L,25μmol/L,50μmol/L,100μmol/L的钛离子进行干预,实时荧光定量多聚酶链反应(Real-time PCR)检测Kv 1.3通道的mRNA的表达情况,流式细胞术检测细胞膜电位及钙离子浓度的变化。同时观察加入ShK-Dap22阻断剂后T细胞膜电位、钙离子浓度及Kv1.3通道的mRNA的表达情况的变化。结果:1、Sh K-Dap22对T细胞增殖具有抑制效应,在0-10 nmol/L时抑制率随浓度的升高而增大,当大于等于10nmol/L时,抑制率无明显差异(P<0.05)。2、PHA(+)组,低、中、高三个浓度组的钛离子可以使T细胞Kv 1.3通道mRNA的相对表达量上调、膜电位去极化及胞内Ca2+浓度上升(P<0.05),加入ShK-Dap22后,这种上调量与ShK-Dap22(-)组相比有明显降低趋势,但与对照组比较有差异(P<0.05)。PHA(-)组,低、中、高三个浓度组的钛离子可以使T细胞Kv 1.3通道mRNA的相对表达量上调、膜电位去极化及胞内Ca2+浓度上升(P<0.05),加入ShK-Dap22后,中、高浓度组的mRNA的相对表达量、膜电位去极化及胞内Ca2+浓度高于对照组(P<0.05),而低浓度组mRNA的相对表达量与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。且低、中浓度组之间的T细胞膜电位去极化及胞内Ca2+浓度比较也无统计学差异(P>0.05)。结论:1、Kv 1.3阻滞剂ShK-Dap22能抑制体外培养的T细胞生长,当Sh K-Dap22超过10nmol/L时抑制率趋于稳定。2、钛离子可通过T细胞膜上钾离子通道Kv 1.3升高胞内钙离子浓度。
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