【摘 要】
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伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）属于疱疹病毒科甲型a疱疹病毒亚科,水痘病毒属,猪疱疹病毒I型。PRV可以引起伪狂犬病,在我国,1947年首例伪狂犬病相关报道是猫感染PRV,随后出现了猪、牛、羊等其他动物感染PRV的情况。到目前为止,至少有18个省、市、自治区（包括台湾）和香港自治区都存在本病。PRV没有明显的季节流行性,一年四季均可发病,而且其的传播方式是垂直传播和媒介
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伪狂犬病病毒（Pseudorabies Virus,PRV）属于疱疹病毒科甲型a疱疹病毒亚科,水痘病毒属,猪疱疹病毒I型。PRV可以引起伪狂犬病,在我国,1947年首例伪狂犬病相关报道是猫感染PRV,随后出现了猪、牛、羊等其他动物感染PRV的情况。到目前为止,至少有18个省、市、自治区（包括台湾）和香港自治区都存在本病。PRV没有明显的季节流行性,一年四季均可发病,而且其的传播方式是垂直传播和媒介传播。感染PRV后有明显的神经症状,严重侵害中枢神经。PRV的宿主有很多,家畜、犬猫等加上野生动物都是它的宿主,其中猪是天然宿主和主要的传染源,伪狂犬病在猪群一旦暴发很难控制,只能对病猪进行淘汰,给养猪业造成巨大的经济损失,除此之外,PRV的高发病率和高死亡率也为我国其他养殖行业带来了危害和损失,而且有报道称PRV可以感染人类。PRV对人类社会的危害越来越大,对由PRV引发的伪狂犬病一直是我国预防的重点,而检测PRV就是预防的前提。传统方法检测PRV如病原分离所需的时间长而且不能大范围检测,而且伪狂犬病目前没有有效的药物能够治疗,主要还是依靠疫苗进行预防。但是传统制作的灭活疫苗内含有的杂质太多,影响了疫苗的效果,所以可以对蛋白质进行提纯即对PRV进行纯化。病毒的糖蛋白能够刺激机体发生免疫反应,它可以作为抗原与抗体特异性结合。因此可以建立一个检测方法对PRV进行快速准确的检测也可以对纯化前后PRV的抗原含量的差异进行比较。本研究先将伪狂犬病病毒进行了扩繁,并对其进行了纯化工序,对纯化前后的样品进行了TCID50检测、SDS-PAGE电泳实验、Western Blot实验、动物实验和中和试验来比较纯化前后伪狂犬病病毒的变化,其中最主要是观察蛋白质的变化。本实验还建立了双抗夹心ELISA方法,其原理是抗原与抗体特异性结合,优化了该方法的捕获抗体和酶标抗体的工作浓度、包被时间、封闭时间、封闭液的选择、酶标抗体反应时间和显色时间,并应用该方法对PRV进行了检测,也对纯化前后的PRV的抗原含量进行了比较。本研究对伪狂犬病病毒进行了纯化并建立了双抗夹心ELISA检测方法来检测PRV和比较纯化前后PRV抗原相对含量的变化,确定了该方法具有特异性、敏感性、稳定性的优点。本研究SDS-PAGE电泳实验和Western Blot实验结果表明纯化后PRV的蛋白比纯化前PRV的蛋白表达水平更高了,蛋白也被提纯了;双抗夹心ELISA检测方法实验结果表示该方法可以对PRV进行准确检测,其能与PRV发生反应,而与其它病原体没有反应;并且根据双抗夹心ELISA检测方法检测纯化后PRV的OD值比纯化前PRV的OD值更大和反应颜色更深的结果,可以得到纯化后PRV的抗原含量比纯化前PRV的抗原含量相对来说增加了的结论。纯化方法对预防PRV的灭活疫苗提供了一种增加和提纯蛋白质的方法,为灭活疫苗预防伪狂犬病提供了新思路,双抗夹心ELISA检测方法的建立为PRV的准确检测提供了更加简单、迅速可以广泛检测样品的方法。
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