论文部分内容阅读
背景:黑素瘤是起源于黑素细胞的恶性肿瘤,治疗起来较困难,近年来因持续增长的发病率和死亡率受到人们重视。细胞凋亡受阻或缺陷是形成肿瘤的机理之一,近年来抑癌基因家族(INGs)的研究正在成为热点。ING4是近年来新发现的一个抑癌基因,它在影响肿瘤免疫逃逸方面的能力正在成为一个新热点。目前国内有关ING4在黑素瘤中的作用的研究还鲜见报道。 目的:检测细胞转染含ING4基因的质粒后,细胞增殖能力及细胞活力的影响,并检测细胞的凋亡情况。 方法:采用Western Blot,CCK8,流式细胞术,TUNEL,透射电镜等方法,检测转染前后细胞目的蛋白表达的变化及细胞周期、凋亡、增值活力的情况,并分析其意义。 结果:转染ING4-M29的A875细胞与转染M29的A875细胞及未转染的细胞相比,在ING4蛋白的表达上显著提高,即验证了该基因在蛋白水平得到了表达,转染成功有效。 流式细胞仪检测结果显示转染ING4-M29的A875细胞出现了明显的凋亡峰,凋亡率为17.27%,明显高于转染M29的A875细胞(2.68%)及未转染的A875细胞(2.34%)。转染ING4-M29的A875细胞的G2/M期细胞比例为20.94%,也明显高于转染M29的A875细胞(9.57%)及未转染A875细胞(8.35%)。 透射电镜显示,转染ING4后,细胞出现皱缩,胞质空泡形成及大量的细胞溶酶体。核膜下染色质边集、浓聚,并出现凋亡小体。 TUNEL法可见转染ING4-M29后,A875细胞群落里有较多凋亡细胞出现,并且细胞的密度明显降低,提示生长受到抑制。 CCK8结果显示转染了ING4-M29的A875细胞出现了明显的生长抑制,其中第四天抑制率达到26.7%±2.1%比较差异有统计学意义(P<0.05)。 结论:抑癌基因ING4可以抑制黑素瘤细胞A875的生长,并能促进细胞的凋亡及影响黑素瘤的细胞周期。