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糖尿病是一种伴有诸多严重并发症的疾病,在退行性糖尿病并发症病变的发生和发展过程中,多元醇代谢通路（polyol pathway,PP通路）起了十分重要的作用。醛糖还原酶（aldose reductase,AR）是多元醇代谢通路中的关键限速酶,是治疗糖尿病并发症的靶位酶,该酶以NADPH为辅酶,使葡萄糖还原为不易透过细胞膜的山梨醇,引起细胞的渗透性损伤,是糖尿病并发症发生的重要原因。由于目前可用于治疗糖尿病并发症的药物不足以满足临床需要,现有的醛糖还原酶抑制剂索比尼尔和托瑞司他等有不同程度的副作用。因而发现和寻找新的安全有效的醛糖还原酶抑制剂显得非常有必要。本研究的目的就是建立一种简便、可靠并可以用于高效筛选醛糖还原酶抑制剂的筛选模型,并在模型的基础上进行了相关的药物筛选。本研究分为四部分:1、建立了一种醛糖还原酶的提取分离纯化的简易方法。将新鲜牛眼晶状体剪碎,在3倍体积磷酸盐缓冲液中手动碾磨;粗提液高速离心除去残渣,向上清中加入适量饱和（NH4）2SO4,以（NH4）2SO4饱和度为40%、50%和75%进行离心分级盐析,将最后得到的沉淀用适量缓冲液溶解,用离心超滤法脱盐纯化。用SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳对粗酶蛋白液进行鉴定。再用双缩尿法测定粗酶蛋白的浓度。2、建立了一种可用于从中药/天然药物中筛选醛糖还原酶抑制剂的体外微量筛选模型,并对其进行了条件的优化。由于NADPH具有极强的还原性,很容易被氧化,酶促反应体系的吸光度随着NADPH的氧化而逐渐降低,利用此特性可以根据反应体系中NADPH被氧化的量来确定AR的活力。本研究以DL-甘油醛为底物,NADPH为辅酶,应用96孔板建立醛糖还原酶抑制剂的微量筛选模型。最终反应体系为总体积为300ul,各组分分别为:100ul PH6.2磷酸钾缓冲液（0.03 mol/L）,30ul 2-巯基乙醇（0.01mol/L）,30ul硫酸锂（0.2mol/L）,18ul NADPH（0.25mmol/L）,25ul DL-甘油醛（3.5 mmol/L）,40ul（含粗酶约3mg）,反应温度为35℃。规定在340nm处反应体系吸光度每分钟下降0.001为一个酶活力单位,此模型灵敏、高效。反应体经优化后,体系稳定,且最终得到的酶活力高达43.2个单位,可用于药物的筛选。3、研究在此模型的基础上进行了相关的药物筛选工作,我们对120种中药提取药物进行筛选,发现有35中药提取物明显能抑制醛糖还原酶的活性（抑制率＞15%）,17种中药提取物存在假阳性现象,68种药物提取无对醛糖还原酶抑制率＜15%)。4、在已筛选的中药中选择对醛糖还原酶有较高抑制率的中药中对其进行粗分,并建立三七总黄酮的初级提取方法及三七总黄酮浓度的检测方法,三七总黄酮浓度为0.745mg/ml,提取率达到了0.7%。经过实验研究发现三七中含有对醛糖还原酶有很高抑制率的物质,抑制率达到了84.3%。本论文研究建立了醛糖还原酶的提取分离纯化、鉴定、粗蛋白浓度测定及活性检测方法,并建立了醛糖还原酶抑制剂体外筛选模型,为抗糖尿病并发症药物的筛选提供了一种筛选方法,在此模型的基础上筛选出了几种能有效抑制醛糖还原酶活性的药物,这几种药物具有一定的开发前景。