论文部分内容阅读
目的本研究基于cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路探究柴胡加龙骨牡蛎汤对慢性不可预见性温和应激（chronic unpredictable mild stress,CUMS）法制备的大鼠抑郁模型的干预作用。方法采用随机数字表法将60只SD大鼠分为正常组,模型组,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组和氟西汀组。除正常组外,其它各组进行28d的CUMS制备大鼠抑郁模型。柴胡加龙骨牡蛎汤组低、中、高剂量组分别给予柴胡龙骨牡蛎汤颗粒剂2.89 g·kg-1、5.78 g·kg-1、11.56 g·kg-1,氟西汀组给予盐酸氟西汀2.06 mg·kg-1,正常组和模型组给予等体积生理盐水,给药21 d,期间各造模组追加造模。旷场实验和强迫游泳实验观察大鼠行为学表现,酶联免疫吸附测定法（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定大鼠海马组织5-羟色胺（5-Hydroxy tryptamine,5-HT）,去甲肾上腺素（Norepinephrine,NE）,环磷酸腺苷（cyclic adenosine monophosphate,cAMP）水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测大鼠海马组织蛋白激酶A（protein kinase A,PKA）,C反应元件结合蛋白（cAMP-response element binding protein,CREB）,脑源性神经营养因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）mRNA表达;蛋白免疫印迹法（Western blot,WB）检测大鼠海马组织PKA,BDNF蛋白表达水平;苏木素-伊红（hematoxylin-eosin,HE）染色和尼氏染色观察海马组织形态学的变化;免疫组化法（Immunohistochemistry,IHC）测CREB定位表达。结果1.行为学实验强迫游泳实验:与正常组相比,模型组大鼠强迫游泳不动时间显著增加（P＜0.01）;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠强迫游泳不动时间显著降低（P＜0.01）。旷场实验:与正常组相比,模型组大鼠运动总距离、中央区停留时间、中央区进入次数、中央区运动距离均显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠运动总距离显著增加（P＜0.01）,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠中央区停留时间显著增加（P＜0.05）,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠中央区运动距离显著增加（P＜0.01,P＜0.05）,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠中央区进入次数显著增加（P＜0.01,P＜0.05）。2.ELISA检测结果与正常组相比,模型组大鼠海马5-HT、NE、cAMP含量显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠海马5-HT含量显著增高（P＜0.01）,柴胡加龙骨牡蛎汤中剂量组大鼠海马NE含量显著增高（P＜0.05）,柴胡加龙骨牡蛎汤低剂量组大鼠海马cAMP含量显著增高（P＜0.01）。3.Real-time PCR检测结果与正常组相比,模型组大鼠海马BDNF和CREB mRNA表达显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠海马CREB mRNA表达显著增加（P＜0.01）,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠海马BDNF mRNA表达显著增加（P＜0.01）。4.Western blot检测结果与正常组相比,模型组大鼠海马PKA和BDNF蛋白表达显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠海马PKA蛋白表达显著增加（P＜0.01）,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠海马BDNF蛋白表达显著增加（P＜0.01）。5.HE染色结果与正常组相比,模型组大鼠海马CA1区神经元数量减少,细胞间隙变大,排列疏松、混乱;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量增加,细胞排列趋于规则,分布均匀。6.尼氏染色结果与正常组相比,模型组大鼠海马CA1区神经元数量减少,细胞排列疏松、紊乱,胞质内尼氏小体减少;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤中、高剂量组大鼠海马CA1区神经元数量有所增加,胞质内可见尼氏小体。7.IHC检测结果与正常组相比,模型组大鼠海马CREB蛋白平均光密度值显著降低（P＜0.01）;与模型组相比,柴胡加龙骨牡蛎汤低、中、高剂量组大鼠海马区CREB蛋白平均光密度值显著增加（P＜0.01）。结论1.柴胡加龙骨牡蛎汤改善抑郁大鼠行为学表现,缓解大鼠焦虑、抑郁情绪。2.柴胡加龙骨牡蛎汤调节抑郁大鼠海马单胺类神经递质5-HT、NE。3.柴胡加龙骨牡蛎汤通过激活cAMP/PKA-CREB-BDNF信号通路,上调BDNF表达,保护海马神经元的结构和功能。