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兰科石斛属植物自古以来就是我国名贵的中草药材,具有极大的观赏价值和重要科研价值。近年来,兰科植物的生长环境遭到了急剧地毁灭性破坏,加之人工过度的采挖,大部分的兰科植物已濒临灭绝。开展兰科植物繁育技术研究是对其保护的基础条件之一。菌根真菌在兰科植物的生长过程中起着不可替代的作用,因此菌根真菌对兰科植物生长的作用机理的研究,是解决珍稀濒危兰科植物保育的关键技术之一。本研究以野生铁皮石斛为材料,利用菌根技术和组培技术建立铁皮石斛与真菌的共生体系。通过在培养基中添加不同浓度的极可善、海藻精、壳聚糖、绿丰源4种添加物,筛选出铁皮石斛组织培养过程中各阶段的最佳培养方案。再选取分离自不同石斛的菌根真菌对铁皮石斛进行共生培养实验,从菌根染色、真菌的重分离、铁皮石斛植株生物量的增长、重引入原生境后的成活率及生长势等方面研究菌根化育苗技术,建立铁皮石斛重引入技术体系。初步获得的主要结论如下：(1)通过4种添加物对铁皮石斛组培苗的生长影响的对比实验,最佳的增殖培养基：1／2MS+30g L-1香蕉+30gL-1土豆+20g L-1蔗糖+0.5g L-1活性炭+7g L-1琼脂+2.5m1 L-1海藻精,其增殖效果最好,平均发芽率达402.9%；最佳壮苗培养基则为1／2MS+30g L-1香蕉+30gL--1土-+20g-1蔗糖+0.5g L-1活性炭+7g L-1琼脂+2.OmlL-1壳聚糖,平均每株鲜重0.416g；最佳生根培养基为1／2MS+30g L-1香蕉+30gL-1土-+20g L-1蔗糖+0.5g L-1活性炭+7g L-1琼脂+3.0 ml L-1壳聚糖,平均每苗具3.007条根。整体效果方面,培养基中添加壳聚糖的效果也优于其它添加物和对照组。(2)采用菌根真菌TP48、TP39、M19和H1对铁皮石斛组培苗进行袋内菌根化育苗和盆栽型菌根化育苗,均可获得菌根化植株。菌根真菌TP48、TP39、M19和H1处理的组培苗鲜重增长率分别高出对照(CK：34.911%)40.023%、22.771%、7.824%、2.742%,其中TP48和TP39菌株处理的组培苗鲜重增长率极显著高于对照。四个菌株处理的盆栽苗平均鲜重增长率分别比对照组高出12.445%、15.101%、9.463%和3.411%,其中TP39菌处理的组培苗平均鲜重增长率显著高于对照组的35.197%。四个菌株分别分离自野生铁皮石斛、野生美花石斛和野生华石斛,通过菌根真菌快速染色和分子鉴定方法,表明分离自不同石斛的菌根真菌与铁皮石斛之间存在着相对选择的亲和性。(3)菌根真菌TP48、TP39、M19和H1处理铁皮石斛无菌组培苗后均可以提高其植株POD活性,但作用时间和强度有所差别,其中TP48可明显提高植株POD活性。四种菌根真菌的菌根化苗重引入现有分布生境和历史分布生境中的成活率不同,生长势也有差异。重引入现有分布生境中的菌根化苗成活率均高于重引入历史分布生境中的,其中TP48菌根化苗重引入现有分布生境中的成活率最高,达76.667%。对重引入植株进行菌根真菌重分离和鉴定发现,优势菌分别属于假尾孢属、球腔菌属、瘤菌根菌属和子囊菌属,除H1外其余植株均分离到原接种菌。