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目的:构建Tetherin真核表达质粒，研究Tetherin蛋白在肝细胞中对乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)复制的影响及其作用机制，为抗HBV感染研究提供新的思路。 方法:PCR扩增人源Tetherin基因，构建Tetherin真核表达质粒。用RT-PCR和Western blot的方法鉴定重组质粒pTetherin-FLAG在HepG2细胞中的表达。将质粒pTetherin-FLAG转染至HepG2.2.15细胞，通过Southern blot、荧光定量PCR、ELISA、Western blot检测手段，了解Tetherin对HBV复制的影响;加入对抗Tetherin作用的pVpu后，检测HBV复制及表达水平，进一步验证Tetherin对HBV的影响。 结果:通过酶切鉴定和DNA序列测定表明正确的将Tetherin基因克隆至真核表达载体pcDNA3.1-3FLAG。转染重组质粒pTetherin-FLAG至HepG2细胞后，RT-PCR和Western blot检测到有Tetherin的表达。将pTetherin-FLAG转染至HepG2.2.15细胞，Southern blot和荧光定量PCR结果显示细胞内HBV DNA、HBV mRNA水平均显著减少，ELISA结果表明细胞分泌HBsAg、 HBeAg显著减少(P＜0.05)，Western blot结果显示HBcAg蛋白表达明显降低(P＜0.05)。当加入pVpu真核表达质粒后，HBV的复制及表达水平得到恢复。 结论:成功构建了Tetherin真核表达质粒，该质粒在HepG2细胞中得以成功表达;Tetherin蛋白在HepG2.2.15细胞中，可以抑制HBV的复制及表达，该作用可以受到Vpu蛋白的对抗。