论文部分内容阅读
目的: 采用离体心脏灌流模型，研究长时程低温保存对心脏的损伤作用，及白藜芦醇(RES)对长时程低温保存心脏的保护作用及其机制。 方法: SPF级健康成年雄性SD大鼠42只，随机分成7组，包括空白对照组（control组），单纯9h低温保存组（9h组），白藜芦醇组(3μM、10μM、30μMRES组)，尼克酰胺组（NAM组:保存液中加入Sirt-1抑制剂尼克酰胺NAM40μmol/L），白藜芦醇+尼克酰胺组（RES+NAM组:保存液中加入30μ mol/L RES和40μmol/L NAM）。采用Langendorff离体心脏灌注装置，经主动脉进行逆行灌注30 min后，改用4℃的Celsior液灌注，待心脏停搏后，各组心脏在4℃条件下不同Celsior心肌保存液中分别保存9h后取出，建立大鼠心脏低温保存模型。用HE染色的方法观察心肌细胞在各组中的形态学变化情况;用RT-PCR方法和Western blotting方法检测Sirt-1和HO-1基因和蛋白在各组中的表达。 结果: (1) RES对长时程低温保存心肌细胞的保护作用与control组相比，9h组HE染色心肌细胞损伤明显，3μM、10μ M、30μ MRES组与9h组相比心肌细胞损伤逐渐减轻; (2) RES对Sirt-1的激活作用与control组相比，9h组Sirt-1表达明显下降(P＜0.01)，3μ M、10μ M、30μ MRES组与9h组相比Sirt-1表达水平呈剂量依赖性升高(P＜0.05); (3) RES对HO-1的上调作用与control组相比，9h组HO-1表达明显下降(P＜0.01)，3μ M、10μM、30μ M RES组与9h组相比HO-1表达水平呈剂量依赖性升高(P＜0.01); (4) NAM取消RES对Sirt-1的激活NAM组Sirt-1的表达最低，RES+NAM组Sirt-1表达比30μMRES组明显降低(P＜0.01); (5)Sirt-1和HO-1在RES长时程低温保存心肌细胞保护作用中的地位与9h组相比，3μ M、10μM、30μ M RES组Sirt-1和HO-1表达升高的同时心肌细胞损伤也逐渐减轻，Sirt-1的抑制剂NAM可取消RES对Sirt-1表达的上调，同时HO-1表达也下降，取消了RES的心肌细胞保护作用。 结论: (1)长时程低温保存诱发心肌细胞损伤明显，RES对其具有显著改善作用; (2) RES诱导Sirt-1和HO-1表达明显上调，表明Sirt-1和HO-1是参与RES对长时程低温保存心脏的保护作用的重要机制之一。