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研究背景原发免疫性血小板减少症（primary immune thrombocytopenia,ITP）是一类出血性自身免疫性疾病,其发病机制迄今还未完全明确,当前多数学者认为与体液免疫和细胞免疫失调相关。中医学认为脾气亏虚、脾不统血是ITP的关键病机,陈信义教授带领的课题组根据ITP病机特点,以“健脾益气摄血”为治疗法则,拟定健脾益气摄血方,方中包含黄芪、党参、炒白术、茯苓、阿胶、茜草、炙甘草七味中药。前期临床研究证实,健脾益气摄血方治疗ITP,可以快速止血、提升血小板数量,且无明显不良反应。有研究发现,ITP患者与健康人群的肠道菌群在组成和功能上均有显著差异,且在ITP发生发展过程中,患者大多具有肠道感染或胃肠功能紊乱等表现,进行相关肠道功能调理可在一定程度上提升血小板数值,表明肠道功能可影响ITP的发生发展。同时在ITP患者体内,存在血管活性肠肽（vasoactive intestinal peptide,VIP）表达水平的异常下降。VIP是一种脑肠轴神经递质,可通过多种途径调节T细胞的增殖分化,发挥抗炎反应以及诱导免疫耐受。基于VIP与肠道免疫功能在机体免疫系统的所发挥的重要作用,课题组认为健脾益气摄血方可能通过调控VIP以及肠道免疫而发挥治疗作用,并期望通过建立ITP小鼠模型,进行相应的基础研究,明确健脾益气摄血方治疗ITP的具体效应机制和作用靶点,为ITP的中医药进一步推广治疗和实验研究提供理论依据和经验。目的以健脾益气摄血方干预ITP小鼠模型,观察肠道免疫功能变化、T细胞亚群相关细胞因子以及血管活性肠肽表达水平,探讨健脾益气摄血方治疗ITP的起效机制,为健脾益气摄血方治疗ITP提供依据。方法采用免疫造膜法构建ITP小鼠模型,设置正常组、模型组、强的松组、健脾益气摄血中剂量组和健脾益气摄血高剂量组共5组。正常组小鼠进行常规饲养不做特殊处理,其余各组小鼠均通过输注豚鼠抗小鼠血小板血清（GP-APS）以成功构建ITP小鼠模型,隔天操作1次,共注射8次。在造模第8天,正常组、模型组均予0.1 ml/10g生理盐水灌胃,强的松组给予浓度为2 mg/ml强的松溶液0.1 ml/10g灌胃,健脾益气摄血组中、高剂量组分别给予健脾益气摄血方颗粒剂4.1、8.2 mg/g灌胃,连续处理8天。期间分别于注射APS前、注射后第4、8、12天以及实验结束后（第16天）检测小鼠外周血小板（PLT）计数。实验结束后,使用流式细胞术检测各组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞的周期变化情况;末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记测定（TUNEL）法检测各组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡率;免疫组化法测定各组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞p53蛋白含量的改变情况;酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测各组小鼠血清各种细胞因子（IFN-γ、IL-2、IL-4、IL-10、IL-17A、TGF-β）表达水平以及小鼠结肠组织和血清中VIP表达水平变化情况。结果1、与正常组比较,模型组在注射APS第4天开始便一直保持PLT低水平状态（p＜0.01）。与模型组比较,用药4天后强的松组及健脾益气摄血中、高剂量组PLT水平显著升高（p＜0.01）,且健脾益气摄血高剂量组高于强的松组;在实验结束时各药物干预组同样保持较高的PLT水平（p＜0.01）。2、与正常组比较,模型组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡率、p53蛋白表达水平均显著升高（p＜0.01）;与模型组比较,强的松组及健脾益气摄血中、高剂量组肠系膜淋巴结淋巴细胞凋亡率、p53蛋白表达水平均显著降低（p＜0.05或p＜0.01）;健脾益气摄血高剂量组和强的松组淋巴细胞凋亡率均低于健脾益气摄血中剂量组（p＜0.01）;各组小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞周期分布差异均无统计学意义（p＞0.05）。3、与正常组比较,ITP模型小鼠IFN-γ、IL-17A表达水平均显著升高（p＜0.01）,IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β表达水平均显著降低（p＜0.01）。与模型组比较,强的松组IFN-γ表达水平显著降低（p＜0.01）,IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β表达水平均显著升高（p＜0.05）,IL-17A表达水平无明显差异（p＞0.05）,但有降低趋势;健脾益气摄血中剂量组IL-17A表达水平显著降低（p＜0.01）,IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β表达水平均显著升高（p＜0.05）,IFN-γ表达水平无明显差异（p＞0.05）,但有降低趋势;健脾益气摄血高剂量组 IFN-γ、IL-17A 表达水平均显著降低（p＜0.01）,IL-2、IL-4、IL-10、TGF-β表达水平均显著升高（p＜0.01）。4、与正常组比较,模型组结肠和血清中的VIP表达水平均显著降低（p＜0.01）;与模型组比较,除了健脾益气摄血中剂量组血清VIP表达水平无显著改变（p＞0.05）外,其余各组VIP表达水平均显著升高（p＜0.05）。结论1、健脾益气摄血方可以有效提升外周血PLT水平,其起效时间要早于强的松。2、健脾益气摄血方可降低ITP小鼠肠系膜淋巴结淋巴细胞p53蛋白含量,减少淋巴细胞的异常凋亡,在一定程度上恢复ITP小鼠肠道免疫功能。3、健脾益气摄血方可能通过VIP调整相关细胞因子水平,恢复Th1/Th2、Th17/Treg平衡,从而有效防治ITP。