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大豆是中国第四大粮食作物和重要的油料作物。长期以来,国内大豆的种植存在大面积连作现象,连作面积已占我国大豆播种面积的20%,近年来受到广泛的关注,由于受市场需求的引导,我国黑龙江地区的大豆连作现象尤其严重,近几年大豆连作面积达到50%~70%。本项研究采用传统形态学与Nested-PCR-DGGE技术相结合的方法研究连作年限对不同大豆品种AM真菌菌群结构的影响,为研究AM真菌对连作障碍的拮抗作用提供理论依据。1.采用碱解离-酸性品红染色法对不同大豆品种生育期内AM真菌侵染率测定表明:连作年限改变会影响AM真菌对于大豆根系的侵染率,同时,不同品种及同一品种不同时期的大豆都会对AM真菌侵染产生一定影响。2.通过统计AM真菌侵染率可知:连作年限的增加会提高AM真菌对于大豆的侵染率,连作三年的样品侵染率普遍高于连作两年的样品;在连作年限相同的情况下,苗期黑农37的侵染率最高,而在分枝期时,则以黑农48的侵染率为高,这说明,不同的大豆品种在不同的生育时期对于AM真菌的侵染效率会发生显著变化。3.经多次试验,最终确定变性梯度凝胶电泳对于大豆根系土壤中的AM真菌的最佳试验条件为:丙烯酰胺浓度8.0%,变性梯度范围为40%-65%,上样样品选用纯化后的PCR产物,电泳时间为9 h,电泳温度为60℃,电泳电压130 V。4.对16条DGGE条带测序结果分析表明,试验样地根际土壤环境中的优势AM真菌主要分为两大类,一类为摩西柄囊霉(Funneliformis mosseae)AM真菌;另一类为球囊霉属(Glomus)AM真菌,还有一些未知的球囊霉属AM真菌,从系统发育树的亲缘关系来看,这些未知的球囊霉属AM真菌也大都与这两类AM真菌有较近的亲缘关系,说明试验样地的大豆根际土壤环境中的AM真菌菌群中的主要优势菌群为摩西柄囊霉(Funneliformis mosseae)及球囊霉属(Glomus)AM真菌,并且这两类AM真菌对大豆根系的侵染效率也最高。5.除AM真菌之外,在16条条带中发现有肉盘菌科(Sarcosomataceae)真菌(M15,相似性达91%),说明本试验所选引物对的引物特异性有一定缺陷。6.连作年限,大豆品种及不同生育时期均对根际土壤中AM真菌的DGGE图谱有影响,差异显著,这与侵染率结果相符。且图谱中各样品的优势种群及优势度最低的种群均有变化,说明连作年限对不同大豆品种AM真菌菌群结构也有显著影响。