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交叉递呈是外来抗原被MHC-Ⅰ类分子限制性递呈的过程,它不同与经典的MHC-Ⅰ类分子递呈途径,在经典的MHC递呈途径中,内源性表达蛋白经蛋白酶体消化后,小部分的降解肽通过TAP进入内质网,在内质网中与新生成的MHC-Ⅰ类分子形成复合物转运至细胞膜,相反MHC-Ⅱ类分子的递呈途径则主要处理进入内吞系统的外来抗原,这样MHC-Ⅰ和MHC-Ⅱ类分子分管着胞内和胞外不同来源的抗原。在体情况下,DC细胞是主要的交叉递呈细胞,它通过在外周获取感染性细胞的内源性抗原,然后迁移到淋巴结,形成的MHC-Ⅰ类分子肽复合物活化抗原特异性的细胞毒性T细胞,在此过程中抗原的来源(细胞内,但是不同的细胞,或者疫苗的接种中的外来抗原)不同于经典的MHC-Ⅰ类分子递呈途径(在抗原递呈细胞内合成的抗原)。因此,在上述抗原递呈中,抗原的降解和肽的运送机制很可能显著不同。近年来,由于认识到交叉递呈在疫苗接种中的重要作用,因此其机制研究引起了广泛关注。胞内膜蛋白运输通常需要含有Rab蛋白的蛋白复合物,其中Rab蛋白是真核生物膜转运事件的关键分子。人类基因组共含有大约70个Rab和Rab样蛋白,它们通常位于不同的膜性结构区域,采用鸟苷酸依赖的开关机制调节膜质运输的四个步骤:囊泡的出芽生成,囊泡的转运,囊泡的栓缚和囊泡与靶膜结构的融合。现有证据显示有几个蛋白位于早期的分拣和回运囊泡(Rab4,Rab5,Rab11,Rab18,Rab22 andRab25),而Rab7和Rab9定位于晚期内吞体,至今在树突状细胞的抗原递呈中,尚无人进行Rab分子的相关研究,因此,本文尝试在树突状细胞中进行此相关研究。本研究希望通过转染Rab5和Rab7突变体,在树突状细胞中高表达Rab5,Rab7和他们的突变体,观察与囊泡转运相关的Rab分子,从而了解抗原的交叉递呈主要发生在吞噬体成熟过程的什么阶段。首先使用Rab5的抑制型突变体Rab5S34N和Rab7的抑制型突变体Rab7T22N观察这两个蛋白对抗原交叉递呈的影响,结果表明Rab5S34N抑制了抗原的交叉递呈,但Rab7T22N对抗原交叉递呈则没有影响。为近一步分析Rab5在此过程中的作用,我们构建了Rab5的活化型突变体RabSQ79L,结果表明其抗原递呈效果与Rab5野生型一致,这说明早期内吞体是抗原交叉递呈发生的主要场所,此研究结果为进一步分析抗原交叉递呈过程中囊泡的转运和调节奠定了基础。