重组腺病毒特异性表达Zebra蛋白激活EBV裂解性复制的研究

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鼻咽癌是一种发生于上皮细胞中的肿瘤,在东南亚,特别是中国南部几个地区,包括广东、广西和香港的发病率较高,达到每年25例/105人。众多证据表明EBV与许多肿瘤的形成有着直接或者间接的关系。本研究首先从EBV潜伏感染的细胞中扩增了EBVZebra编码序列与重要调控序列和启动子序列Cp,Zp和oriP等,并在此基础上,利用一种高效构建重组腺病毒的方法一共构建了7株由不同调控元件控制表达EBVZebra蛋白的重组腺病毒,比较了这些病毒在带有EBV和不带有EBV的细胞中表达Zebra的能力和专一性。结果表明,各重组病毒感染的293细胞(EBV阴性)中,Zebra表达水平最高的是rAdv-CMVZebra,最低的是rAdv-OCpZebra和rAdv-OCpZpZebra。其他的病毒表达量位于其间。 比较各重组病毒在不同细胞系中表达Zebra的情况,发现利用增强子oriP和C启动子联合调控的Zebra表达(重组腺病毒rAdv-OCpZebra)虽然表达量较采用强启动子CMV的重组腺病毒(rAdv-CMVZebra)少,但却显示了很强的EBV阳性细胞特异性,同时在EBV阴性细胞中,即使在很高的MOI的情况下,表达水平也非常低,有可能发展成为理想的特异性载体。   进一步比较了这7个重组腺病毒激活潜伏感染腺病毒的能力,发现它们均能够诱导EBV进入裂解性复制状态,诱导潜伏感染EBV表达EA-D,GP350等与病毒裂解性复制有关的蛋白。而不表达Zebra的对照病毒rAdv-GFP则不能。   比较了rAdv-OCpZebra与rAdv-GFP对EBV阳性细胞和阴性细胞的杀伤作用,进一步验证了前者能够非常有效的特异的杀伤EBV阳性细胞。而添加GCV后能进一步提高rAdv-OCpZebra对EBV阳性细胞的杀伤效率,观察到了一定的旁观者效应。   
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