家蚕生殖腺的蛋白质组学及+P基因的SSR定位研究

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家蚕幼虫斑纹种类繁多,易于识别,是遗传学研究的极好材料。利用诱变手段使载有普斑基因的染色体片段易位到W染色体上,使普斑性状只出现在雌体,创造出斑纹限性家蚕品种。控制普斑性状的是由第二染色体上的+~P基因调控的,该基因位于经典连锁图谱中第2连锁群0.0cM处。本文选用斑纹限性家蚕品种H9,采用双向凝胶电泳和计算机辅助分析的方法,分别对限性斑纹品种雌蚕(普斑)和雄蚕(姬蚕)的五龄第四天、六天和蛹期第二天的生殖腺蛋白质进行分离和比较分析。六张双向电泳图谱均可见到分离出100个以上的点,雌雄间存在特异性蛋白,部分差异蛋白质可能与斑纹的形成有关,或是与W染色体的易位片段上其它未知基因有关;不同时期雌雄生殖腺的匹配率都在75%左右,其中五龄第四天最高,蛹期第二天最低,这可能与变态发育阶段生殖腺正处于旺盛分化时期的特点有关。利用家蚕雌性不发生交换的遗传规律,采用幼虫斑纹为普斑(+~P)的家蚕品系p50和斑纹限性家蚕品系H9组配正反交群体(H9×p50)×H9和H9×(H9×p50),分别记作BC1F和BC1M,利用已经构建的家蚕SSR分子标记连锁图谱中第2连锁群上的15对SSR标记引物对+~P基因进行定位及连锁分析。结果筛选出3个与+~P基因连锁的SSR标记,利用BC1M群体构建家蚕+~P及其连锁的SSR标记遗传连锁图,连锁图的遗传距离为22.5cM,+~P基因被定位在11.3cM处,位于标记S0206和S0211之间且距离S0206最近,为3.0cM。Kaikoblast分析结果表明,S0206和S0211之间物理距离为995Kb。进一步Kaikoblast分析显示有三个基因距离+~P较近,分别是BGIBMGA009689, BGIBMGA009688和BGIBMGA009687,其中BGIBMGA009689最近,仅19.1Kb。上述结果有助于探讨生殖腺蛋白差异与性别分化的功能关系,探索家蚕性别基因的表达调控机理,对+~P基因的精细定位及分子标记的斑纹限性辅助育种具有重要意义。
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