论文部分内容阅读
背景与目的随着现代科学技术的不断发展，人们的生活节奏不断加快，生活环境污染程度的加重，不孕症患病率有逐年上升趋势，这严重影响了夫妻感情和家庭和睦及社会的和谐发展。而辅助生殖技术（assisted reproductive technology，ART）的出现，为临床治疗不孕症提供了新方案，为不孕症患者带来了新的希望。体外受精-胚胎移植技术（in vitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET）作为ART的一项重要治疗措施，其体外受精率虽然很高，可达90%,但其临床妊娠率却一直徘徊在较低水平，仅30%—60%，远不能够满足广大患者的需求。影响人类成功妊娠的主要因素有：子宫内膜厚度、胚胎质量、子宫内膜对胚胎的接受性和子宫内膜的微环境，而子宫内膜厚度是关系到子宫内膜对胚胎接受能力和维持胚胎继续生长发育的关键因素。近年来对增加子宫内膜厚度的方法主要有，子宫内膜轻创术和药物治疗。子宫内膜轻创术对医生的操作技术要求比较高，选择刺激时机也比较严格，对于临床经验不丰富的医生不宜实施，药物治疗有生长激素、雌激素、阿司匹林和中药方剂，虽然都取得一定疗效，但生长激素，价格比较昂贵，增加患者的经济负担；雌激素和阿司匹林的安全性尚存在众多质疑；中药方剂煎制较麻烦，服用不方便，患者依从性差，从而达不到较好的治疗效果。而坤泰胶囊是一种纯中药制剂，服用方便，并有临床研究显示，其不仅可以改善患者的卵巢功能，还可以增加不孕症患者的子宫内膜厚度。但坤泰胶囊的作用机制尚不完全明了。本研究的目的是通过观察坤泰胶囊对控制性超排卵和超排卵小鼠增殖期子宫内膜厚度、组织形态学的影响以及对表皮生长因子（epidermal growth factor，EGF）、胰岛素样生长因子-I(insulim-like growth factor-I，IGF-I)、增殖细胞核抗原（proliferrating cell nuclear antigenting，PCNA）和白血病抑制因子（leukaemiainhibitory factor，LIF）表达的影响，分析其对子宫内膜的作用和作用机制，为坤泰胶囊用于临床提高妊娠率提供实验依据。材料与方法选择清洁级健康昆明未孕雌性小白鼠为实验研究对象，饲养条件室内湿度为60%～70%，室内温度为18℃～20℃，12小时暗室，12小时光照，自由摄食，饮水，观察小白鼠的动情周期，选择动情周期连续正常的小白鼠，随机分为7组，每组各15只，即为对照组（A组），超排卵组（B组），超排卵+常规剂量坤泰胶囊组[灌服坤泰胶囊90.1mg/100g体重（B1组）]，超排卵+大剂量坤泰胶囊组[常规剂量2倍（B2组）]，控制性超排卵（COH）组（C组），COH+常规剂量坤泰胶囊组[灌服坤泰胶囊90.1mg/100g体重（C1组）]，COH+大剂量坤泰胶囊组[常规剂量2倍（C2组）]。依据相关文献，建立实验动物模型。超排卵组及超排卵组+常规剂量坤泰胶囊组、超排卵+大剂量坤泰胶囊组，每只小鼠每天上午9时腹腔注射等体积生理盐水，连续9天，至第9天9时加注射PMSG10IU/只，COH组及COH+常规剂量坤泰胶囊组、COH+大剂量坤泰胶囊组于小鼠动情后期开始，每只小鼠每天上午9点腹腔注射GnRHa1.5μg/100g体重，连续9天，至第9天9时，每只小鼠加注PMSG10IU。对照组于小鼠动情前期颈椎脱臼处死，超排卵组、超排卵+常规剂量坤泰胶囊组、超排卵+大剂量坤泰胶囊组、COH组、COH+常规剂量坤泰胶囊组、COH+大剂量坤泰胶囊组，均于小鼠注射PMSG48小时后颈椎脱臼处死，开腹取出子宫，进行固定及指标检测。小鼠子宫内膜形态学的观察采用HE染色，小鼠子宫内膜厚度的测量使用多功能图像分析仪，检测小鼠子宫内膜中EGF、IGF-I、PCNA以及LIF蛋白的表达定位及进行半定量分析采用免疫组化SP法，所有数据利用统计软件SPSS17.0进行分析，定量资料采用t检验和tˊ检验，数据采用均数±标准差表示，检验水准0.05。结果1、加坤泰胶囊组小鼠子宫内膜厚度显著厚于未加坤泰胶囊组小鼠子宫内膜厚度（P＜0.01），且小鼠子宫内膜间质较疏松、腺体数目较多、腺腔较大，分布均匀。2、LIF蛋白及EGF蛋白主要表达于小鼠子宫内膜腔上皮细胞及腺上皮细胞的胞浆中，少量表达于间质细胞胞浆中。IGF-I蛋白主要表达于子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞浆中，中等量表达于间质细胞胞浆中。PCNA蛋白主要表达于子宫内膜腔上皮细胞和腺上皮细胞的胞核中，少量表达于间质细胞胞核中。3、EGF、IGF-I、PCNA以及LIF蛋白在超排卵组、COH组小鼠子宫内膜中的表达均显著低于对照组（P＜0.01），且超排卵组显著低于COH组（P＜0.01）。4、EGF、IGF-I、PCNA以及LIF蛋白在超排卵组和COH组小鼠子宫内膜的表达均分别显著低于加常规剂量坤泰胶囊组和加大剂量坤泰胶囊组（P＜0.01）。5、EGF、IGF-I、PCNA以及LIF蛋白在加常规剂量坤泰胶囊组小鼠子宫内膜的表达仍显著低于对照组和加大剂量坤泰胶囊组（P＜0.01）。6、EGF、IGF-I、PCNA以及LIF蛋白在对照组小鼠子宫内膜中的表达与COH+大剂量坤泰胶囊组比较差异无显著性（P＞0.05）。结论1、坤泰胶囊能显著增加小鼠子宫内膜厚度，促进小鼠子宫内膜生长发育。2、坤泰胶囊能显著提高控制性超排卵和超排卵组小鼠子宫内膜中EGF、IGF-1、PCNA及LIF蛋白的表达水平，且加大坤泰胶囊剂量提高更明显。3、坤泰胶囊可能是通过提高控制性超排卵和超排卵小鼠子宫内膜组织中EGF、IGF-I、PCNA以及LIF蛋白的表达水平，而增加子宫内膜厚度的。