【摘 要】
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海洋微生物来源的天然产物因其独特的结构与生物学活性而备受关注,特别是有研究证实海洋动植物体内的微生物是其活性化合物的真正生产者。海蟑螂(Ligiaoceanic)是中国南方沿
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海洋微生物来源的天然产物因其独特的结构与生物学活性而备受关注,特别是有研究证实海洋动植物体内的微生物是其活性化合物的真正生产者。海蟑螂(Ligiaoceanic)是中国南方沿海渔民治疗跌打损伤常用的药用动物,但目前对海蟑螂及其微生物的次级代谢产物(Secondary Metabolites,SMs)的研究较少,难以确认其药用活性成分。本研究以海蟑螂肠道内海洋真菌Z5为研究对象,经rDNA序列鉴定为曲霉属菌株(Aspergillussp.)。应用二代高通量测序技术对该菌株进行全基因组测序分析及antiSMASH基因簇分析,结果显示Z5菌株基因组大小为33.8 Mbp,系统进化处于A.versicolor分支,共含有89个SMs生合成基因簇,结合One-Strain-Many-Compounds(OSMAC)结果说明:该菌具有合成多种SMs的潜能;全基因组挖掘的SMs基因簇数量远超OSMAC分析的化合物数量,多数基因簇在现有培养条件下为沉默状态,如激活这些沉默基因簇的表达,极可能获得新型活性化合物。为开展该菌株的生物合成研究而获得新型化合物,本研究构建了 Z5的遗传转化系统,探索优化原生质体制备纯化方法,确定可通过β-巯基乙醇预处理及蔗糖分层纯化法获得再生率为94%的高质量原生质体,并应用Double-Joint PCR替代传统酶切连接法构建基因盒,最终通过PEG/CaCl2转化,获得Z5的营养缺陷型菌株。本研究为海洋真菌新型天然产物的获得提供重要来源,为开发应用该类真菌天然产物奠定基础,有助于阐明海洋真菌系统进化及与海洋动植物活性产物的关联,为开发利用其它海洋真菌活性天然产物提供经验方法。
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