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第一部分 Shp2在肥大细胞活化过程中的作用及其机制研究 蛋白酪氨酸磷酸酶Shp2参与了许多由免疫球蛋白受体介导的信号通路，并在其中中发挥了很重要的作用，但是Shp2在免疫球蛋白受体FcεRI介导的信号通路中所起的作用却没有被阐述。FcεRI主要分布在肥大细胞和嗜碱性粒细胞的表面，能与免疫球蛋白E(IgE)高亲和力结合。在特异性多价抗原的刺激下，FcεRI分子由于相互交联，在膜表面聚集继而被活化，由此起始胞内一系列信号级联反应，最终导致细胞活化。本研究利用Shp2表达下调的RBL-2H3肥大细胞，观察了Shp2在RBL-2H3肥大细胞活化过程中所起的作用，并进一步探讨了Shp2在其中的信号调节机制。我们的研究表明Shp2在RBL-2H3肥大细胞的活化过程中具有不可或缺的作用。抗原诱导FcεRI活化后，RBL-2H3细胞的脱颗粒、钙离子流以及各种细胞因子信使RNA(message RNA，mRNA)的合成，包括白介素-1β(interleukin-1β，IL-1β)，白介素-10(interleukin-10，IL-10)和单核细胞趋化因子蛋白1(monocyte chemoattractant protein1，MCP-1)，都由于Shp2的低表达而被显著抑制。采用免疫印迹(immunoblotting)，免疫共沉淀(immunoprecipitation)以及GST-pull down等分子生物学研究手段，我们发现Shp2表达下调的RBL-2H3肥大细胞相比正常的RBL-2H3肥大细胞，活化后胞内许多重要的信号分子活性都被抑制，这些分子包括Fyn，Akt, JNK，p38MAPK以及Ras/Erk1/2.进一步的研究表明FcεRI活化后，由于Shp2表达下调，信号分子Paxillin的磷酸化水平也被下调，但CbP/PAG的磷酸化不受影响。总之，我们的研究结果表明，IgE受体FcεRI在RBL-2H3细胞膜表面交联后，胞内蛋白Shp2通过调节Fyn和Ras的活性促进了RBL-2H3肥大细胞的活化。Shp2对这个过程的调节不需要CbP/PAG的参与。同时，我们的研究结果揭示Paxillin在FcεRI起始的信号通路中作为Shp2下游的一个间接底物，发挥促进RBL-2H3肥大细胞活化的作用。 第二部分 Neurokinin1 receptor(NK1R)在肥大细胞活化过程中的作用及其机制研究 肥大细胞是炎症反应中的主要效应细胞。在特异性抗原的刺激下，肥大细胞借由其表面受体FcεRI的交联启动肥大细胞活化，使之释放大量的炎性介质，促进了炎症的发生发展。因此对肥大细胞活化机制的研究，可以帮助我们找到更特异更有效的治疗炎症疾病的治疗靶点。大量的研究表明，神经肽受体neurokinin1receptor(NK1R)与多种炎症疾病密切相关，提示NK1R可能参与了肥大细胞的活化过程。本部分研究利用RBL-2H3肥大细胞为研究对象，构建特异性耙向NK1R的小发夹RNA（shRNA），通过瞬时转染的方式将shRNA转入野生型RBL-2H3肥大细胞从而下调NK1R在RBL-2H3肥大细胞中的表达水平。构建肥大细胞活化模型，观察NK1R的表达下调对肥大细胞活化的影响，并探讨NK1R在肥大细胞活化过程中所参与的信号调节机制。我们的研究结果显示，RBL-2H3肥大细胞活化后，由于NK1R的表达下调，单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)信使RNA(mRNA)的表达水平明显降低;同时胞内钙离子浓度提升的幅度（钙离子流）也显著地低于NK1R正常表达的细胞。这些结果表明，NK1R在RBL-2H3肥大细胞的活化过程中扮演着重要角色。更进一步，对NK1R在RBL-2H3细胞中的信号调节机制研究发现，NK1R的表达下调导致细胞活化后丝裂素活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases，MAPKs)，包括Erk1/2，JNK及p38MAPK，磷酸化过程被部分抑制，即NK1R的表达下调降低了MAPKs在RBL-2H3细胞活化过程中的活性。这提示NK1R在RBL-2H3肥大细胞的活化过程中参与了对MAPK信号通路的调节。 综上所述，本部分的研究结果首次揭示了NK1R在RBL-2H3肥大细胞的活化过程中参与了对MAPK信号通路的调节，并促进MCP-1 mRNA合成以及胞内钙离子浓度提高，具有明显的促炎作用。