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肺癌因其发病率和死亡率高的特点,如今已成为严重危害人类健康的恶性肿瘤之一。由于多数肺癌确诊时已在晚期,所以肺癌患者的5年存活率始终在15%以下。治疗肺癌的传统方法包括手术治疗、化学治疗和放射性治疗。但是传统的治疗方式局限性和副作用较大。因此近年来,以细胞膜表面受体为靶点的靶向治疗成为研究的热门。目前使用较为广泛的药物均是以表皮生长因子受体(EGFR)为靶点的酪氨酸激酶抑制剂。但是由于该类物质的长期使用,越来越多的病例中出现耐药性增强的现象。因此我们把研究的目标放在针对血管表皮生长因子受体(VEGFR)的抑制剂上。目前以VEGFR为靶点的药物主要用于治疗肾癌、肝癌和胃癌等癌症。但在肺癌的治疗中却鲜有使用。因此我们选择了几种VEGFR酪氨酸激酶抑制剂,通过探究这几种抑制剂对非小细胞肺癌增殖和凋亡的影响,为治疗肺癌提供新的思路。 本文研究了Linifanib、Tivozanib、TSU-68和Laetrile四种小分子化合物对A549细胞和H358细胞增殖的影响。我们先用不同浓度的药物预处理细胞48小时,然后在倒置显微镜下观察细胞形态的变化,再用MTT法检测细胞存活率。结果显示Linfanib和Tivozanib能抑制肺癌细胞的增殖,并且呈现剂量依赖性。同时,我们可以观察到相应的形态学变化。TSU-68和Laetrile对细胞的存活率影响不显著,形态学变化不明显,以上结果提示TSU-68和Laetrile可能对治疗肺癌没有明显的效果。因此后续实验我们仅针对Linfanib和Tivozanib进行更深入的研究。细胞存活率的变化主要是由细胞凋亡和细胞周期阻滞两方面引起的。因此,接下来我们通过流式细胞仪对细胞周期和凋亡情况进行检测。结果显示Linifanib可以诱导细胞凋亡,同时也能引起细胞周期在G2/M期阻滞。Tivozanib主要引起细胞周期在G2/M期阻滞。G2/M期的阻滞主要是由细胞周期蛋白、细胞周期蛋白依赖激酶(CDK)以及CDK抑制蛋白(CKIs)来调控。CDK起到正调控作用,CKIs起到负调控作用。通过检测与调控细胞周期相关蛋白的mRNA表达情况可以进一步验证药物对细胞周期的影响。因此我们检测了细胞周期蛋白Cyclin D1和肿瘤抑制因子P21的mRNA表达量。结果显示Linifanib和Tivozanib均可以引起A549和H358细胞P21的mRNA表达量显著升高,而药物对Cyclin D1的mRNA表达量影响不大。生长因子通过与相应受体结合,可以激活细胞内纷繁复杂的信号通路。这些信号通路调控细胞的增殖、分化和凋亡等一系列生物学进程。其中PI3K/AKT是调控细胞生长和增殖的一条重要的信号通路。并且PI3K/AKT信号通路可以被上游VEGFR调控。因此我们对AKT磷酸化的水平进行检测。结果显示Tivozanib可以下调AKT磷酸化水平,抑制PI3K/AKT信号通路。为了探究Linifanib和Tivozanib对正常细胞增殖和凋亡的影响,我们用药物处理16HBE细胞,检测细胞存活率。结果显示用低浓度Linifanib(2μM)处理16HBE后,细胞存活率大于肺癌细胞组,而用Tivozanib或高浓度Linifanib(5μM和10μM)处理16HBE细胞后,细胞存活率均小于肺癌细胞组。结果提示低浓度 Linifanib可能对机体副作用较小,有望用于肺癌的治疗。