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第一章ZHC116抗UUO大鼠肾间质纤维化的疗效观察研究背景肾间质纤维化(Renal interstitial fibrosis, RIF)是指由多种原因引起的细胞外基质(Extracellular matrix, ECM)在肾间质的过度沉积,是多种慢性肾脏病(Chronic Kidney Disease, CKD)进展至终末期肾病(End-stage renal disease,ESRD)的病理基础和共同通路。探讨肾间质纤维化的发生机制、研发抗肾间质纤维化的药物对慢性肾脏疾病的控制具有重要意义。ZHC-116是本课题组设计的新一代抗纤维化新药。前期体外研究表明,ZHC116具有抗肾小管上皮细胞转分化(Epithelial mesenchymal transition,EMT)的作用,具有抗纤维化的潜能。目的观察ZHC116对单侧输尿管结扎(Unilateral Ureteral Obstruction, UUO)大鼠肾间质纤维化动物模型间质损伤、纤维化、Ⅲ型胶原表达的影响。方法建立UUO肾间质纤维化模型。SD大鼠(20只,每组5只)随机分为假手术组、UUO模型14天组、ZHC116(100mg/d)治疗组、吡非尼酮(500mg/d)治疗组；于UUO术后14天留取各组大鼠梗阻侧肾脏标本,用HE和Masson染色方法观察大鼠肾间质纤维化成模情况及药物疗效,免疫组化方法观察Ⅲ型胶原表达。结果UUO术后14天,模型组大鼠梗阻侧肾脏肾间质损伤指数、Masson染色评分以及Ⅲ型胶原表达比假手术组显著升高(p<0.05)；与模型组相比,ZHC116和吡非尼酮治疗均能显著降低UUO大鼠梗阻侧肾间质损伤评分、Masson染色评分和Ⅲ型胶原的表达(p<0.05)；与毗非尼酮治疗组相比,ZHC116治疗组肾间质Ⅲ型胶原阳性表达面积百分比显著减少(p<0.05)。结论ZHC116具有抗肾间质纤维化的作用,100mg/kg ZHC116疗效优于500mg/kg吡非尼酮。第二章ZHC116对AngⅡ刺激肾小管上皮细胞MAPK通路的影响研究背景肾素-血管紧张素-醛固酮系统(RAAS)的激活,尤其是血管紧张素Ⅱ (Angiotensin Ⅱ)的产生是肾间质纤维化和慢性肾脏病进展的重要介质。丝裂原活化蛋白激酶(Mitogen-activated protein kinase, MAPK)是参与多种细胞过程如分化、增殖、炎症、纤维化的重要信号转导通路。Ang Ⅱ可以诱导肾小管上皮细胞MAPK通路的活化,参与肾间质纤维化中的炎症、氧化应激、细胞增殖、致纤维化因子产生等发病机制。初步研究显示ZHC116具有抗肾间质纤维化的疗效,本部分将初步探讨ZHC116抗肾间质纤维化的作用机制。目的观察ZHC116对Ang Ⅱ刺激大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E) MAPK通路中细胞外信号调节激酶1/2(Extracellular signal-regulated protein kinase1/2, ERK1/2)通路的影响。方法培养NRK-52E细胞,设立正常对照组、Ang Ⅱ刺激模型组、AngⅡ+ZHC116治疗组、Ang Ⅱ+p-ERK抑制剂组。模型组予以Ang Ⅱ(10-7M)刺激15min; ZHC116治疗组予以ZHC116(50ug/ml)预处理24小时,并用Ang Ⅱ (10-7M)刺激15min；抑制剂组p-ERK抑制剂(PD98059,10μM)处1h,并用Ang Ⅱ(10-7M)刺激15min。同时收集各组细胞总蛋白,Western Blot方法检测p-ERK、ERK、β-actin的表达。结果Ang Ⅱ刺激NRK-52E细胞15min后,p-ERK/ERK蛋白表达比值(p<0.05)增高；ZHC116和p-ERK抑制剂能够显著降低p-ERK/ERK蛋白表达比值(p<0.05)。结论ZHC116可能通过抑制Ang Ⅱ诱导的ERK1/2磷酸化起到抗肾间质纤维化的作用。