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利用家蚕核型多角体病毒BmNPV Bac-to-Bac表达系统构建了能够表达蝎毒素蛋白基因的重组病毒载体,在培养细胞中进行了表达,并通过生物学实验分析了重组蝎毒素蛋白的生物活性和杀虫效果。研究结果如下:
1、为了提高表达水平,利用BmNPV多角体蛋白编码基因部分序列与蝎毒素基因进行融合表达,构建了两个带有多角体蛋白编码基因15 bp和35 bp的两个供体质粒,并进一步通过细菌转座作用获得了两种融合表达蝎毒素基因的重组BmNPV病毒。利用家蚕培养细胞BmN进行了重组蛋白的表达,SDS-PAGE分析发现重组蛋白得到了较高水平的表达,并发现融合表达策略可以提高蝎毒素蛋白的表达水平。
2、利用经口添食含重组病毒表达的蝎毒素蛋白的BmN细胞匀浆液,分析了它对不同龄期家蚕幼虫和棉铃虫幼虫的生物学毒性。发现表达产物具有较好的杀虫效果。对不同龄期家蚕幼虫的添食实验表明,蚁蚕添食后的死亡率达80%;给1龄期的家蚕和棉铃虫幼虫经口添食,当添食剂量在2.8μg/头时,家蚕的死亡率即达100%,棉铃虫的死亡率达74%。
本研究结果对于利用家蚕杆状病毒开发新型生物杀虫剂具有较好的参考价值和指导意义。