在糖尿病治疗方面,共载基因与降糖药物进行联合治疗不仅能够避免单一药物的某些缺陷,同时较好的给药设计能使药物之间发挥协同作用,对于糖尿病的治疗具有重要意义。本文利用离子凝胶法和超临界流体-压缩二氧化碳抗溶剂法制备了壳聚糖以纳米粒(CS NPs)的形式镶嵌于聚乳酸多孔微球上的微镶纳体系,同时负载了siRNA和GLP-1(胰高血糖素样肽1)。对微镶纳体系的粒径和形貌的最佳工艺进行了研究,同时对其理化性能进行了表征,并且建立了动物模型,也在分子水平上对该共载体系的降糖效果进行了初步研究。本学位论文主要工作概括如下:1.壳聚糖(CS)纳米粒与聚乳酸(PLLA)多孔微球的制备与表征:通过离子凝胶法制备壳聚糖纳米粒后,分别对其进行了FTIR、TEM和SEM表征。结果表明,当在壳聚糖和TPP浓度分别为2 mg/mL和1 mg/mL,壳聚糖的pH值为5.0条件下,可制备得到粒径在50~300 nm之间,表面光滑且粒径分布窄的壳聚糖纳米粒。在利用超临界抗溶剂技术制备多孔微球方面,考察了薄荷醇的量、乳液流速、CO2流速、喷嘴尺寸对多孔微球的形貌和粒径分布的影响。得出在超临界压缩CO2压力为8 MPa、温度为30℃、薄荷醇的量与PLLA的质量比为1∶1、乳液流速为4 mL/min、CO2流速为40 g/min、喷嘴尺寸为0.006英寸条件下,能制得多孔且表面粗糙的空白PLLA多孔微球,平均粒径为10.43μm,Span值为1.34。对该多孔微球进行了TEM、SEM和激光粒度仪表征,并考察了其雾化性能与空气动力直径。该微球空气雾化持续时间0.12 s,雾化效率96.16±5.21%,具有良好的空气动力学性能,保证了后续肺部给药能有效的进行。2.微镶纳多孔高分子微球的构建及其载药性能研究:首先,在最优的条件下制备了共载siRNA和GLP-1的微镶纳多孔微球,并对该体系进行了FTIR,XRPD等表征。研究了其在不同投药量(5.0%、7.5%、10.0%)下其几何粒径和空气动力学粒径情况。负载药物后,利用该法仍能获得具有较大几何粒径与较小空气动力学粒径的微球。其次,通过激光共聚焦(LSCM)与能谱(EDS)表征,研究了CS NPs在多孔微球中的分布情况,发现CS NPs能比较均匀的镶嵌于多孔微球的基质上,有利于后续药物的释放。最后,载药方面考察了siRNA和GLP-1的体外释放情况,siRNA在CS NPs中的载药量为94.8%,可在32 h内释放完全。GLP-1在微球中实际的载药量随理论投药量的增加而逐渐增加(依次为3.60%、6.28%及8.80%),并在36 h内可释放完全。3.多孔siRNA/GLP-1微球的生物相容性及其降糖效果初步研究:共载微镶纳体系在体外对细胞生长无明显抑制作用,且有机残留量极低。溶血率测试、急性全身毒性和细胞毒性实验结果显示,经超临界抗溶剂过程制得的微镶纳多孔微球具有良好的生物相容性。4.在共载siRNA与GLP-1微镶纳体系的降糖活性研究方面:通过建立2型糖尿病小鼠模型来研究该共载体系对在糖尿病小鼠体内的降糖效果,对比单载siRNA与GLP-1组,共载siRNA和GLP-1的微镶纳体系取得了较显著的联合治疗效果。更进一步的,从分子水平对共载载体系降糖活性进行了研究,QRT-PCR结果表明共载siRNA和GLP-1的微镶纳体系对DPP-4-mRNA的表达量具有明显抑制,与单载组相比较可知,共载组中的siRNA发挥了明显基因治效果。这些结果与动物实验研究降糖结果类似。综上,经优化超临界参数后的微镶纳多孔微多孔且具有较粗糙的表面结构和球形度,纳米粒能较均匀镶嵌于PLLA基质上。该微镶纳体系具有良好的空气动力学性、载药性能和生物相容性。动物实验和分子实验表明,共载siRNA和GLP-1的微镶纳体系具有良好的降糖活性,有望进一步应用于共载基因和药物进行多各类疾病的联合治疗。