双歧杆菌被认为是人肠道内最重要的益生菌,是评价人健康状况的指标之一。它能够调节并维持肠道微生态平衡,调节机体免疫,拮抗致病菌,合成营养物质,调节血脂,防治肿瘤等,具有保健、防病、治病的三重功效,一直倍受关注。双歧杆菌的粘附是其定植和发挥生理作用的前提,近年来许多学者进行了双歧杆菌粘附机制的相关研究,但尚未有定论。本研究采用比较蛋白质组学的研究方法,筛选出长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞Caco2相互作用前后差异表达的蛋白,通过质谱鉴定和生物信息学分析,最后确定目标蛋白Enolase、Tuf作为本研究的对象。构建重组质粒并在大肠杆菌中进行了GST融合表达,利用GST pull down技术证明纯化蛋白Enolase、Tuf能够与真核细胞表达的Plg相互作用,证明表达的目标蛋白具有Plg受体的功能。最后通过竞争性抑制实验,证明Enolase和Tuf蛋白能抑制双歧杆菌的粘附。本研究利用比较蛋白质组学筛选出34个长双歧杆菌NCC2705与宿主细胞Caco2相互作用的差异蛋白,为双歧杆菌粘附机制的研究提供了新的角度;从34个差异蛋白中筛选出两个细胞壁蛋白Enolase和Tuf作为研究对象,并证明是粘附相关蛋白,为进一步阐明双歧杆菌粘附机制奠定了基础。