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新城疫（Newcastle Disease，ND）是由新城疫病毒（Newcastle Disease Virus，NDV）引起的一种禽类呼吸道、消化道和神经系统损伤为主要特征的急性、高度致死性传染病。NDV为单股负链 RNA 病毒，属于副黏病毒科禽副黏病毒属。NDV基因组全长约为15kb，基因组排列顺序为3’-NP-P-M-F-HN-L-5’，其基因编码包括核蛋白（nucleoprotein， NP），磷蛋白（phosphoprotein，P），基质蛋白（matrix protein，M），融合蛋白（fusion protein, F)，血凝素神经氨酸酶（hemagglutinin-nueraminidase ， HN)和大聚合酶蛋白（RNA-dependent RNA polymerase or large ploymerase，L）在内的6个主要蛋白。其中， M蛋白在病毒的装配、出芽过程中发挥重要的作用。作为非保护性抗原且表达量丰富的M 蛋白能够诱导机体产生高滴度的抗体。但是，对其抗原表位的了解却知之甚少。本研究主要利用肽扫描及多种免疫学技术对M蛋白B细胞优势抗原表位（Immunodominant epitope，IDE）进行筛选鉴定，主要研究结果如下： 1. M蛋白抗原位点的分布情况分析。首先用DNAStar Protean软件对NDV疫苗毒株LaSota的M蛋白进行二级结构进行分析。使用数据库Immune Epitope Database（IEDB）， ABCpred和Bcepred对M蛋白B细胞抗原表位进行综合预测。根据信息生物学分析结果，将M蛋白分为 M1-177和M178-365两段，利用Western blot和间接免疫荧光（IFA）方法结合LaSota疫苗免疫的鸡抗血清检测M蛋白的抗原性。结果显示M蛋白及其分段表达产物和抗血清具有良好的反应，推测其抗原位点可能均匀分布于整个蛋白。 2. M蛋白IDE筛查。对LaSota株鸡抗血清靶M蛋白进行肽扫描分析，筛查潜在的IDE，得到6个高反应区。为了确证其有效性，将它们分别融合红色荧光蛋白（RFP）进行真核表达，通过IFA、Western blot检测以及其合成肽的Dot-blot和ELISA验证，结果表明M71-85（MIDE2）和M349-363（MIDE6）为实际有效的IDE。 3. IDE免疫原性和抗原性检测。将人工合成的IDE多肽免疫小鼠，制备抗表位的小鼠血清抗体。Dot-blot检测表明M71-85（MIDE2）和M349-363（MIDE6）序列合成肽能够刺激小鼠产生较高水平的抗体而且和对应的鼠抗血清具有良好的反应，揭示其具有良好的免疫原性和抗原性。 4. 最小有效表位的鉴定。分别从上述2个IDE的N端和C端对表位序列进行连续氨基酸突变，利用Western blot结合表位小鼠抗血清进行检测，结果显示其最小表位分别为 77MIDDKP82和 354HTLAKYNPFK363。 5. 确定IDE在毒株间的保守性。将 77MIDDKP82和 354HTLAKYNPFK363在NDV不同毒株对应位置的氨基酸序列进行比对分析。结果表明它们在不同毒株中具有较高的保守性。利用Western blot结合表位小鼠抗血清的检测结果显示其与Class II类中基因II型（LaSota株）、VI型（SX10株）、VII型（JS株）、IX型（F48E9株）以及Class I类(pigeon/QH株)毒株反应均呈阳性，表明这两个IDE在多数毒株中具有较高的保守性。 综上所述，本研究主要利用肽扫描技术鉴定出了NDV M蛋白2个有效、最小的IDE：M71-85和M349-363，并揭示了其在多数NDV基因型毒株中具有较高的保守性，可作为生物学标记为NDV的免疫学诊断及标记疫苗的研发奠定基础。